磺基水杨酸与牛血清白蛋白相互作用的荧光法研究.pdfVIP

( ) 第 28 卷 第 1 期 河北师范大学学报 自然科学版 Vol . 28 No . 1 2004 年 　1 月 Journal of Hebei Normal University (Natural Science Edition) J an . 2004 磺基水杨酸与牛血清白蛋白相互作用的荧光法研究 李 　娜 , 　张玉平 , 　魏永巨 (河北师范大学 化学学院 ,河北 石家庄 　0500 16) ( ) ( ) 摘 　要 :用荧光法研究了 5 磺基水杨酸 SSA 与牛血清白蛋白 B SA 之间的相互作用. 实验发现 SSA 可 以猝灭 B SA 的荧光 , 同时自身的荧光敏化增强 ,表明两者之间发生了能量转移. 能量转移的机理是 B SA 与 SSA 结合形成了复合物. SSA 在 B SA 2 12 位色氨酸残基附近的结合数为 1 ,结合常数为 6 . 5 ×105 . 疏水力是结 合反应的主要作用力. 基于 Forster 能量转移理论确定了 SSA 与 B SA 2 12 位色氨酸残基间的距离为 1. 55 nm . 研究了实验条件对反应的影响 ,在 p H 4 . 0～8. 0 之间 ,B SA SSA 复合物基本稳定 ,离子强度对复合物形成有 明显影响. 关键词 :磺基水杨酸 ; 牛血清白蛋白; 荧光 中图分类号 :O 657 . 39 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2004) 0 1005005 ( ) 5 磺基水杨酸 5 sulfo salicylic acid ,SSA 是一种常用的化学试剂. 在分析化学中 ,SSA 用作光度法 测定 Fe3 + ,U O22 + , Ti4 + 等离子的显色剂[ 1 ] . 在 ED TA 存在下 , SSA 与 Tb3 + ,Dy3 + 等稀土离子形成具有 荧光的络和物[ 1 ,2 ] . SSA 本身具有荧光[3 ] ,笔者曾详细研究过 SSA 的荧光性质并首次测量了 SSA 的荧 光量子产率[4 ] . 在生物医学领域 ,SSA 用作蛋白质的沉淀剂. 笔者在研究 SSA 与蛋白质的相互作用时发 ( ) 现 ,在牛血清白蛋白 B SA 溶液中加入 SSA ,则 B SA 的荧光被猝灭 , 同时 SSA 自身的荧光被敏化增强. 本文中 ,笔者对这一荧光现象进行了深入研究 ,将有助于了解 SSA 与蛋白质相互作用的机理. 1 　实验部分 1. 1 　仪器与试剂 ( ) ( ) F 4500 荧光分光光度计 Hit achi ;U V 250 1 PC 分光光度计 Shimadzu ; 828 型台面式 p H/ ISE ( ) 测试仪 Orion . SSA :天津市化学试剂一厂出品 ,含量 99 . 0 % , 以水配成 3 . 25 mmol/ L 溶液 ,使用时适当稀释 ; B SA :北京百泰生化技术公司出品 ,分子量按 68 000 计 , 以水配成 1. 0 mg/ mL 溶液 ,根据 0 . 1 %的B SA [5 ,6 ] 水溶液在 280 nm 处的吸