负载肝癌抗原的树突状细胞疫苗对SCID荷瘤鼠的抑瘤作用观察.pdfVIP

山东医药 2008年第48卷第47 · 基础研 究 · 负载肝癌抗原的树突状细胞疫苗对 SCID 荷瘤鼠的抑瘤作用观察 谢斌辉 ，刘凤恩 ，王小农 ，徐道峰 ，何 晓 ，彭宝岗 ，梁力建 (1赣南医学院第一附属医院，江西赣州341O0o；2中山大学附属第一医院) [摘要] 采用人外周血淋巴细胞腹腔注射法建立人外周血淋巴细胞一严重联合免疫缺陷(Hu．PBL．ScID)鼠 模型。随机分为四组：I组尾静脉注射mRNA未致敏的树突状细胞 (DC)疫苗，Ⅱ组注射抗cD4 、CD8 +mRNA Dc，Ⅲ组为DC，Ⅳ组为PBs，每周 1次，共2次，然后接种2×1O肝癌细胞HepG ，观察鼠成瘤率、成瘤潜伏期、肿 瘤体积以及测定特异性细胞毒淋巴细胞(cTL)活性；流式细胞术检测体内种植瘤的细胞周期；用EusA法检测鼠 血清中是否有人IgG。结果鼠血清中均有人IgG，Hu-PB【一scID嵌合模型重建成功，各组小鼠间成瘤率无明显差异， 但 I组成瘤潜伏期延长，肿瘤生长缓慢，2周后肿瘤体积明显小于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(PO．05)，I组脾淋巴细胞对HepG． 2有特异性杀伤效应。 I组 HepG_2有75．82％ ±4．78％处于Go／G1期，13．54％ ±2．55％处于s期 ，l0．64％ ± 2．36％处于G：／M期，与 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ比较 ，PO．O5。认为负载肝癌抗原的Dc疫苗体内能诱导产生明显的抑瘤作用。 [关键词] 树突状细胞；肝肿瘤 ；树突状细胞疫苗；免疫缺陷鼠 [中图分类号] R735．7 [文献标识码] B [文章编号] 1Oo2．266x(2oo8)47．0H D3 研究结果表 明负载肿瘤抗原的树突状细胞 细胞集落刺激因子 (GM—csF)，异硫氰酸荧光素 (Dc)疫苗能诱导产生特异性的免疫应答，具有显著 (FITc)单克隆抗体，抗 CD 、CD 单抗。 的抗肿瘤效应，其主要机制是通过激活初始T淋巴 1．2 方法 细胞成为细胞毒淋巴细胞(cTL)从而达到抗肿瘤 目 1．2．1 肝癌RNA抗原的提取与鉴定 取处于对数 的[1】。20o4—2o05年，我们以严重联合免疫缺陷 生长期的HepG-21．0×lO／rIll，按 试剂盒说 小鼠(ScID)为研究对象，通过腹腔注射肝癌患者外 明书常规抽提总RNA，分光光度计测定 OD260／OD280 周淋巴细胞(PBL)、皮下注射肝癌细胞建立了人肝 值，计算总 RNA纯度和含量，1％琼脂糖电泳检测 癌PBL。SCID嵌合模型，通过人肝癌 PBL—sCID嵌合 RNA完整性，置一80cI=保存。 模型观察负载肝癌抗原的cD疫苗在小鼠体内诱导 1。2．2 Dc的体外诱导 抽取肝癌患者外周血20 特异性抗肝癌免疫并探讨其机制。 Inl，以PBS1：1稀释后，经淋巴细胞分离管，梯度离 1 材料与方法 心(25。=【，2000r／min离心25min)，收集外周血单 1一 实验材料及试剂 NOD一17scID小鼠，4～5 核细胞(PBMC)，用含 l0％FBS的RPMI—l640悬浮 周龄，44只，雌、雄各半，体质量 l8～25g，无菌条件 细胞，调整细胞浓度为2．O×10／ml，接种于6孔板 下饲养，温度 25℃ ±5℃，相对湿度4O％～70％。 中，置37℃、5％CO：的培养箱中培养2h后，吸走 鼠尾采血2oo l，IgG10 ml者可进行实验。外 非贴壁细胞，附壁细胞用 PBS轻洗 2次，用含 IL-4 周静脉血取 自中山大学附属第一医院肝胆外科经病 (50oU／fn1)、GM—CSF(10ng／m1)、lO％FBS的RP— 理确诊的原发性肝癌患者 。人肝癌细胞株HepG一2， MI．1640继续培养，隔日换液。 人 胃癌细胞株SGc-7901。 1．2．3 DC疫苗的制备 采用 DavidBoczk0wski RPMI一1640完全培养基、Opti—