触觉诱导后小鼠大脑皮层Barrel cortex区域c-fos的表达变化及意义.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第39期 · 基础研 究 · 触觉诱导后小 鼠大脑皮层 Ba=elcortex区域 c．fos的表达变化及意义 夏 东，祝 延 (安徽医科大学，安徽合肥 230030) [摘要】 将 15只成年雄性小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(7只)。实验组小鼠放置于新笼内，给予触觉 刺激，20min后灌注固定处死动物。对照组不受任何刺激，相同时间用同样方法处死。用免疫组化染色法观察c．fbs 在小鼠大脑皮层 Barrelcortex区域的表达情况。结果由于诱导了胡须刺激 ，皮层 Barrelcortex的 Ⅱ m层 c-los蛋白 表达增加，尤其是在第Ⅳ层。认为诱导胡须刺激诱导c．‰基因表达，证实小鼠胡须刺激与大脑皮层中Barrelcortex 的神经元可塑性分子机制之间的联系。 [关键词] 柱状皮层；c．‰ 蛋白；胡须刺激；体表感觉皮层 [中图分类号] R338．2 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)39．1~26-02 观测大脑皮层可塑性不仅可以为认识可塑性机 2％戊巴比妥钠 (60mg／ks)腹腔麻醉，升主动脉输人 制提供基本方法，同时还可对相应医疗过程中的大 冲洗液，接着灌注固定液处死动物，随即取脑组织， 脑皮层可塑性增强作用予以评价，由此成为神经系 置于固定液中过夜。用蔗糖磷酸缓冲液进行防冰晶 统可塑性研究中的一项重要内容H ]。啮齿动物体 处理，制作冰冻切片，厚度为 50pan。取冠状切片。 感皮层具有 良好的组织学与功能上的拓扑对应关 把脑片固定在玻片上，风干(2～4d)，PBS清洗，Nissl 系，为可塑性研究提供了有利条件[4]。c一 是转录 染液浸泡 5min后，70％的酒精脱色，梯度酒精脱 因子蛋 白质，它们基因表达的改变被普遍认为是神 水，二甲苯透明，树胶封片。PBS清洗 2遍，37℃在 经元可塑性的分子生物学基础l5]。如今，文献中所 细胞色素氧化酶染液孵育3h，再用 PBS清洗，固定 记录的胡须刺激实验模型，都需要固定动物、给动物 在玻片上，风干，再用 PBS清洗，脱水，包埋于玻片 造成痛苦、麻醉等，影响实验结果_6]。在此基础之 上 。 上，2007年7月，我们构思了一种更为简单的动物 1．2．2 c． 的检测 应用免疫组化学 ABC法进行 实验模型，以研究胡须触觉刺激对 c一 表达所产生 c． 的检测。抗c． 的绵羊多克隆抗体 (Santaeruz) 的相关影响。 为一抗。稀释浓度为 1：1000。二抗与三抗使用 1 材料与方法 VeetastainEliteABC试剂盒。在一抗孵育前，以正常 1．1 实验动物准备 l5只成年雄性小鼠全部饲养 兔血清封闭非特异性蛋 白结合位点 1h。在三抗孵 于树脂玻璃笼中(60cm×45cm×25cm)，自然光线 育前，以3％oH202的甲醇液淬灭内源性过氧化酶活 昼夜循环交替，上覆盖直径 1．5mm钢丝编制的 1．5 性20min。一抗孵育时间为4℃70h，然后置室温2 cm间隔的网盖，供应水和食物。 h，二抗和ABC三抗孵育时间均在2h以上。二抗与 1．2 实验方法 三抗稀释按试剂盒说明进行。常规脱水、透明及封 1．2．1 实验动物处理及组织切片制备 15只小鼠 片。c．f0s细胞核呈深棕色。细胞计数组织切片的 被随机分为两组，其中实验组8只，对照组7只。实 全部图像采用 MCID计算机成像分析系统 (MCID 验组小 鼠放置于一个新的(50cm×40cm×40cm)钢 ELITE7．0，ImagingResearch)收集。分别对小鼠大脑 丝笼(直径用 1．5am钢丝编织 ，间隔 1cm)中20min 左右两个半