中国药典与欧美药典对支原体检查培养基规定的差异 - 中国药品标准杂志.doc

中国药典与欧美药典对支原体检查培养基规定的差异 范文平，赵宏大，谢 文（中国食品药品检定研究院，北京 100050） 中图分类号：R921.2 文献标识码：A 文章编号： Comparison the Differences of Media Provisions on Mycoplasma Test among Chinese Pharmacopoeia, European Pharmacopoeia and U.S. Pharmacopoeia Fan Wenping, Zhao Hongda, Xie Wen (National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050) 支原体污染对于研究和工业生产的细胞培养系统是一个严重而普遍的问题，可影响试验结果的准确性和给生物制剂、生物药物和病毒疫苗带来安全隐患[1]。《欧洲药典》（EP）6.0版[2]的支原体检查方法与5.0版[3]相比发生了许多变化，《美国药典》于2010年第一次载入支原体检查法[4,5]，与EP6.0大致相同，仅在细节上有些变化。《中国药典》三部自2005年版以来未对支原体检查法做任何修订。近年来国内外对支原体研究的新成果和培养基产业的发展，亟待《中国药典》的支原体检查法进一步修订。采用适宜的培养基培养仍是目前各国药典进行支原体检查的标准方法之一，而支原体对培养基的营养要求和毒性物质的限制要求高于一般细菌培养基，所以，培养基的质量是支原体检查的关键因素。本文对现行版《中国药典》与最新版本的《欧洲药典》8.0版 [6]、《美国药典》（USP）36版[7]支原体检查方法中培养基的相关规定进行了比较，分析其中的差异可能会对试验结果造成的影响，为《中国药典》的进一步优化和修改提供参考依据。 1 使用支原体培养基的差异 1.1 培养基选择原则 EP8.0和USP36的支原体检查方法中专门规定了培养基的选择原则，均规定所选择的多个培养基应能支持所列出的6种支原体的生长。在药品支原体检查的阳性对照支原体菌株上EP和USP存在差异：EP规定使用所列出的6种支原体至少一种作为阳性对照菌株；USP规定使用至少2种已知的支原体作为阳性对照菌株，一种为糖发酵型支原体，另一种为精氨酸分解型支原体。在检测昆虫来源的细胞系时，USP还规定应加入一种螺原体(spiroplasma)作为阳性对照菌株。《中国药典》没有相应的规定。 1.2 培养基种类 EP和USP支原体检查方法推荐了三种培养基：Hayflick培养基、Frey培养基和Friis培养基，每种培养基均有液体和固体两种使用形态，三种培养基分别用于支原体的一般检测、对禽源来源的滑液支原体(M. synoviae)的检测和非禽源性支原体的检测。《中国药典》2010年版三部支原体检查法推荐了两种培养基：支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基，分别用于糖发酵型支原体和精氨酸分解型支原体的检测，其中支原体肉汤培养基还有半流体和固体两种使用形式。中国药典与欧美药典培养基配方之间差异较大。EP和USP均明确规定其它培养基也可以使用，但必须证明其具有支持支原体生长的能力。《中国药典》列出的培养基使用“推荐”二字，没有“其它培养基也可以使用”的描述。 1.3 对培养基配方的描述方式 EP和USP对培养基配方的描述方式采用二级结构，即首先以一级结构的形式列出培养基的配方，再对培养基配方中的一些成分复杂、难以标准化或对质量要求苛刻的组分以二级结构的形式提出了明确的配方或质量标准。列出配方或质量标准的培养基构成组分有：牛心浸液(Beef Heart Infusion Broth)、必需维生素(Essential Vitamins)、Hanks平衡液、脑心浸液(Brain Heart Infusion)、PPLO肉汤和纯化琼脂(Agar, Purified)，其中牛心浸液、必需维生素、Hanks平衡液、脑心浸液等以液体形式加入的培养基组分的二级配方中明确规定了各成分的含量，这样在最终使用的培养基中，这些营养成分的含量是相对准确的。《中国药典》对培养基配方的描述方式采用一级结构，培养基的两个组分猪胃消化液和牛肉浸液是以液体形式加入的，但对这二者的制法、配方、成分含量却没有进一步的规范，这有可能导致其中含有的营养成分含量的不确定。 2 对培养基质量控制检查方法的差异 2.1检测用支原体菌株 EP和USP分别规定了六个质量控制检测用支原体菌株：莱氏无胆甾原体(A. laidlawii)、鸡败血支原体(M. gallisepticum)、猪鼻支原体(M. hyorhinis)、口腔支原体(M. orale)、肺支原体(M. pneumoniae)或其它葡萄糖发酵支原体、和滑液支原体(M