在培养基上将细菌稀释或分散成.ppt

一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对________的不同需求，配制出供其生长繁殖的________。 2．无菌技术 (1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 (2)关键：________。 (3)措施 3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：计算→称量→溶化→________→________。 (2)纯化大肠杆菌 ①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成________，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ②方法：________、________。 (3)菌种的保藏 ①短期保存：________上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存：________中－20℃在冷冻箱中保藏。 为什么在倒平板时，等平板冷却后要将平板倒置？ 二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 1．菌种筛选：使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。 2．统计菌落数目：常用方法有________、显微镜直接计数法。 3．细菌分离与计数的实验流程：土壤取样→配制________→微生物的培养与观察→细菌的计数。 三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 (1)组成：纤维素酶是一种复合酶，它包括___________ ________________________________________________________________________。 (2)作用 2．菌种筛选 (1)方法：_________________________________。 (2)原理 3．筛选流程 土壤取样：富含________的环境 　↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量 　↓ 梯度稀释 　↓ 涂布平板：将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上 　↓ 挑选产生透明圈的菌落：产生________的菌落周围出现透明圈 一、1.(1)营养物质 营养基质 (3)固体培养基 2.(2)防止外来杂菌的入侵 (3)煮沸　灼烧　高压蒸汽　3.(1)灭菌　倒平板　(2)①单个细胞 ②平板划线法 稀释涂布平板法 (3)①固体斜面培养基 ②甘油瓶 二、2.稀释涂布平板法 3.培养基 三、1.(1)C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 2.(1)刚果红染色法 (2)是否产生透明圈 3.纤维素 纤维素酶 [想一想]　提示：将平板倒置的目的是防止培养皿盖上的水珠滴落到平板上造成污染。 1．教材第17页倒平板操作的讨论 (1)培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 (2)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 2．教材第18页平板划线操作的讨论 (1)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 (3)在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 3．教材第22页两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数106的培养基中，得到以下两种统计结果：1. 第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板统计的菌落数分别为20、200、239，并且取平均值153作为统计结果。 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学