微藻细胞油脂含量的快速检测方法.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１）：６４７２ 微藻细胞油脂含量的快速检测方法 １ ２ １ １ ３ ３ １ 张敬键 　吕雪娟 　李爱芬 　万凌琳 　吴　洪 　尹顺吉 　张成武 （１暨南大学生命科学技术学院　热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心　广州　５１０６３２） （２华南农业大学测试中心　广州　５１０６４２） （３新奥科技发展有限公司煤基低碳能源国家重点实验室　廊坊　０６５００１） 摘要　以斜生栅藻（ＳｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓＪＮＵ２０）为实验材料，采用尼罗红（ＮＲ）荧光光谱法和傅里 叶变换红外光谱法（ＦＴＩＲ）测定该藻细胞中的油脂含量。研究结果表明ＮＲ的最佳染色条件为： 染色前微波处理４０ｓ，二甲基亚砜体积分数１％，ＮＲ最终质量浓度１．５ ｇ／ｍｌ，染色时间５ｍｉｎ，染 μ 色温度４０℃。比较了ＮＲ荧光光谱法、ＦＴＩＲ与传统重量法测定的该藻在不同时相的油脂积累情 况，利用激光共聚焦显微镜观察了细胞中油体形成的动态过程。实验结果表明ＮＲ荧光光谱法、 ２ ２ ＦＴＩＲ与传统重量法测定的结果显著相关（Ｒ ＝０．９２５８，Ｒ ＝０．９８４４），但 ＮＲ荧光光谱法和ＦＴＩＲ 更简便快速，研究结果为规模化筛选高含油量藻株及跟踪产油微藻油脂积累过程奠定了基础。 关键词　斜生栅藻　油脂　尼罗红　荧光光谱　傅里叶变换红外光谱 中图分类号　Ｑ９４９ 　　面对能源危机，利用微藻生产生物燃料及其相关 （Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｄｉｍｏｒｐｈｕｓ）和若 夫小球 藻 （Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ 高附加值产品引起了人们的极大关注，已成为目前化 ｚｏｆｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）的染色效果。因此，ＮＲ荧光光谱法是微藻 石能源替代燃料研究的热点。微藻生物燃料生产是涉 简便，直观，快速的油脂检测方法。红外光谱分析法是 及多方面技术集成的系统工程，其中，优良产油藻株的 一种广泛应用于农业、食品、石化、医疗等领域的快速、 筛选与评价是首要关键技术。微藻种类多，结构各异， 简便、非破坏性分析技术，基于有机物分子的Ｃ－Ｈ、Ｎ 如何快速准确地检测藻细胞的油脂含量，高效筛选优 －Ｈ、Ｏ－Ｈ等含氢基团在红外光区的特征吸收和强度 良产油藻株，对微藻生物柴油生产至关重要。传统的 不同，定性和定量分析生物细胞的不同有机大分子组 ［１２］ 重量法和各类色谱法测定动物、植物材料及微藻细胞 分 。该技术在国外已用于微藻生物技术研究领 中的脂类含量，所需生物样品量大，且有机溶剂提取时 域［１３－１６］，在国内尚未见报道。 间长［１－２］。ＮＲ是一种具有较强疏水性的荧光染料，与 　　实验室前期研究证实，绿藻斜生栅藻（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ 中性脂结合，呈现黄色荧光，与极性脂结合呈现橙色荧 ｏｂｌｉｑｕｕｓＪＮＵ２０）具有很高产油潜力，它的最大总脂含 ［３］ ［１７］ 光 。．研究表明，ＮＲ染色后细胞荧光强度与其油脂含 量为５３．３％ 。本文以ＳｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓＪＮＵ２０为 量显著相关［４－１０］。Ｃｈｅｎ等［１０１１］研究报道，采用二甲基 材料，对ＮＲ染色条件进行了优化，并采用傅里叶变换 亚砜（ＤＭＳＯ）和微波辅助ＮＲ染色，显著提高了采用普 红外光谱技术检测了细胞中油脂的相对含量，同时结 通的染色方法不易染色的普通小球藻 （Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ 合激光共聚焦显微镜观察了细胞中油体的形成过程。 ｖｕｌｇａｒｉｓ）、假绿球藻（Ｐｓｅｕｄｏｃｈ