紫外分光光度法测定甘露醇血药浓度的方法评价论文.pdfVIP

紫外分光光度法测定甘露醇血药浓度的方法评价 沈芊 吕冠博 贾丹 王淑洁 王育琴 首都医科大学宣武医院 摘要 目的 探讨测定甘露醇血清药浓度的紫外分光光度法 方法 以0.05mol/L高碘酸将甘露醇氧化成甲醛 再加 入Nash试剂与甲醛反应显色 于 412nm波长处测定吸收值 并考察显色温度 时间及葡萄糖对甘露醇测定结果的影 响 结果 血清标准曲线线性范围0.12.0mg/mlr= 0.9998低 中 高3 种浓度的日内RSD 值分别为 1.40% 2.14% 2.60% 日间RSD 值分别为 1.98% 2.36% 3.95% 平均回收率 97.20 0.62% 室温显色2 小时至2 小时40 分钟时测定误差小 线性关系好 葡萄糖可干扰甘露醇的测定 结论 本法线性范围宽 重现性好 当血糖水平相对 稳定时可用于甘露醇的血药浓度测定 关键词 甘露醇 血药浓度 紫外分光光度法 甘露醇是一种渗透性利尿药 能够降低颅内压和眼内压 从而治疗脑水肿和青光眼 此外它有防止 血压上升 动脉硬化 脑膜炎等功能 因此临床上大量使用 但近年来甘露醇的不良反应日益多见 特 [1] 别是肾功能损害甚至导致死亡的报道时有发生 发生ADR的原因除大剂量长期使用甘露醇外 还与患 者因素 配伍用药 给药途径等因素有关 因此有必要对甘露醇进行血药浓度测定 但现有的测定甘露 [2] [3] 醇血药浓度的方法多为气相色谱法 不适合基层医院开展工作 康丕顺等 和简洁 先后采用紫外分光 光度法测定了甘露醇的血药浓度 即用高碘酸将甘露醇氧化成甲醛 将过量的高碘酸用硫代硫酸钠还原 后加入Nash试剂与甲醛反应显黄色来测定甘露醇的血药浓度 我们对该法进行了重复实验并对影响因 素及临床适用性进行了考察 1 材料和试剂 紫外分光光度计 美国惠普8453-型 台式离心机 Biofuge pico 德国 GZ- 1 多用震荡器 北京 冰箱电机厂 电热三用水箱DS60 北京医疗设备厂 HANGPINGFA2004 电子天平 上海天平仪器 厂 甘露醇标准品 SIGMA 公司 乙酸铵 高碘酸 三氯乙酸 乙酰丙酮 硫代硫酸钠等试剂均为分 析纯 2 样品的处理 2.1 Nash 试剂的配制 称取25 克乙酸铵加蒸馏水溶解至100ml 用醋酸或氨水调节pH 至6.0 临用前 加乙酰丙酮使含量达0.3% V/V 2.2 0.05mol/L 高碘酸的配制 称取1.15g 高碘酸 置于 100ml 容量瓶中 加蒸馏水至刻度 所得溶液浓 度约为0.05mol/L 2.3 10%三氯乙酸的配制 称取10g 三氯乙酸 用蒸馏水定容至100ml 2.4 血清样品的处理 取0.5ml 血清样品置于1.50ml 的离心管中 加入0.60ml 的10%三氯乙酸溶液 震 荡混匀 13000转/分离心5分钟 取上清液0.50ml 于10ml 容量瓶中 加入1.00ml 的0.05M 高碘酸溶 液 混匀静置15 分钟后加入0.1M 硫代硫酸钠溶液2.50ml 和Nash 试剂3.0ml 显色后加蒸馏水至刻度 3 试验条件的选择 3.1 测定波长的选择 将甘露醇加入三蒸水和人空白血清中 按 2.4 项下方法处理后 于紫外分光光 度计上进行扫描 结果见图1 由图可知显色后样品的最大吸收波长为412nm 图1.水和血清中甘露醇显色后的紫外吸收光谱图 a 血清中 b 水中 3.2 显色时间和温度的选择 用三蒸水配制浓度为 100 200 400 800 1000 1600 和2000 g/ml 的 标准品溶液数份 按 2.4 项下方法处理后 分别置于室温 40 60 的恒温水浴 每隔20 分钟测 定一次 记录不同浓度点在不同显色温度和时间的吸收值 并进行线性回归 结果表明 见表1 只有 当在室温显色2~2 小时40 分时 标准曲线的相关系数好 且变异小 表