高效双螺旋点扩展函数相位片的设计与实验研究 - 物理学报.pdf

物理学报 Acta Phys. Sin. Vol. 62, No. 12 (2013) 124201 高效双螺旋点扩展函数相位片的设计与实验研究* 李恒 于斌 陈丹妮 牛憨笨† ( 深圳大学光电工程学院, 光电子器件与系统(教育部/广东省) 重点实验室, 深圳 518060 ) ( 2013年1月31 日收到; 2013年3月4 日收到修改稿) 双螺旋点扩展函数具有随离焦连续旋转变化的特性, 结合单分子定位方法可用于厚样品三维超分辨成像及分 子定位追踪研究. 但双螺旋点扩展函数不足之处是光能利用率低, 对于光子数受限的荧光显微成像而言其应用受限. 本文通过对双螺旋点扩展函数在空域、频域和拉盖尔- 高斯模式面等三个不同域中进行约束优化. 模拟结果表明, 优化后的双螺旋点扩展函数的光能效率提高了30 多倍. 同时, 基于最优设计方案制备了相位片, 并实验验证了该设 计的正确性. 与文献报道相比较, 本文结果在成像深度和光能利用率方面都有所改善. 关键词: 双螺旋点扩展函数, 超分辨成像, 轴向定位, 优化算法 PACS: 42.30.−d, 42.30.Lr, 87.64.M−, 87.64.−t DOI: 10.7498/aps.62.124201 DH-PSF 具有更大的焦深范围, 并且在整个焦深范 1 引言 围内, 点扩展函数的形状近似不变, 仅随轴向位置 的变化它们之间连线的旋转方向发生改变, 相较其 近年来, 单分子定位显微成术(single-molecule 他点扩展函数形状发生变化的方法, 更便于精确实 localization microscopy, SMLM) 的发展, 如光敏 现轴向定位. 定位显微术(photoactivated localization microscopy, 然而, DH-PSF 方法存在光能利用效率较低的 PALM)1、随机光学重建显微术(stochastic optical 问题. 由于SMLM 需实现单分子所发荧光的探测, reconstruction microscopy, STORM)2、荧光光敏定 这时信号很弱, DH-PSF 方法对荧光光能的损失使 位显微技术(fluorescence photoactivation localization 得该方法难以获得广泛的应用. 若能通过改进解决 microscopy, FPALM)3 等, 突破了光学衍射极限的 此问题, 由于其焦深大将会大大改变目前的应用局 限制, 空间分辨率达到20 nm 左右, 使得人们能够 13 面 . 在分子水平下对细胞内精细结构、功能和某些动 本文首先介绍DH-PSF 形成原理以及该方法 态过程进行观察, 有力地推进了生命科学等诸多领 目前存在的主要问题; 在此基础上, 通过优化设计 域的发展4−7 . 从本质上讲, 它们都是利用荧光标 和理论模拟, 获得最佳设计方案1415 ; 最后, 加工制 记本身的开关效应, 通过稀疏激发、分时成像、质 作出优化的相位板. 理论模拟和实验结果表明, 本 8 心定位以及图像合成来实现纳米分辨成像 . 结合 文设计和研制出的DH-PSF 相位板其光能利用率 9 具有轴向分辨能力的方法, 如柱面镜法 、双焦面 达到原始双螺旋点扩展函数的30 倍以上, 使该方 10 11 探测法 、荧光干涉法 以及双螺旋点扩展函