软骨藻酸多克隆抗体的制备 - 海洋科学.pdf

嫄, , , , ( , 200240) 摘要: 为建立软骨藻酸(DA)的免疫检测法, 本研究采用活泼酯法将 DA 与载体蛋白 KLH(BSA)偶联形 成完全免疫抗原( 包被抗原), 并通过紫外光谱扫描证明偶联成功与否。用完全免疫抗原 DA-KLH 对新 西兰白兔进行免疫, 间接ELISA 法测定血清效价。实验结果表明偶联成功, 经过 19 周免疫后血清效价 达到1:1600, 纯化后获得效价为1:800 的多克隆抗体, 同时也间接证明了合成的完全抗原具有免疫原性, 为以后建立免疫分析法奠定了基础。 关键词: 软骨藻酸; 多克隆抗体; 活泼酯法 中图分类号: R392-33 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2010)12-0067-03 (Domoic Acid, DA) 1 材料与方法 (Amnesic Shellfish Poisoning, ASP) 1.1 实验材料 DA 1958 1.1.1 (Chondria armata) , (DA)ALEXIS , 98%; A-H [1] ABC (BSA)(KLH) [2] DA DA (FCA)(FIA) , (DMSO)1-(3-)-3- [3] DA (EDC·HCl) Sigma ; N- , (NHS)Tween-20(TMB)96 ASP , DA ( 8000) 20 μg/g [4] DA ; IgG HPLC-UVD ; Millipore ( , 10000); ; , HPLC-UVD (Codex Committee on Fish and Fishery Products, 1.1.2 CCFFP)[5] ; Multiskan Mk 3 , ( ); GNP-9050 ; HANGPI