核酸分子杂交技术 - 刘腾飞.pptVIP

硝酸纤维素膜： 优点：吸附能力强，杂交信号本底低。 缺点：DNA分子结合不牢固 尼龙膜： 优点：结合单链，双链DNA的能力比硝酸纤维素膜强 缺点：杂交信号本底高 化学活化膜： 优点：DNA与膜共价结合；不同大小的DNA片段有同等结合能力； 缺点：结合能力较上述两种膜低 2．印迹方法 虹吸印迹法 真空转移法 电转移法 直接点印法（斑点、狭缝；菌落或噬菌斑） （1）虹吸印迹法 利用浓盐转移缓冲液的推动作用，将凝胶中的DNA转移到固相支持物上。 其基本原理是：容器中的转移缓冲液含有高浓度的NaCl和柠檬酸钠，上层吸水纸的虹吸作用使缓冲液通过滤纸桥、滤纸、凝胶、硝酸纤维素滤膜向上运动，同时带动凝胶中的DNA片段垂直向上运动，凝胶中的DNA片段移出凝胶而滞留在膜上 虹吸印迹法 DNA片段1kb，1小时 DNA片段15kb，18小时 （2）真空转移法 此法原理与毛细管虹吸法相同； 以滤膜在下，凝胶在上的方式将其放置在一个真空室上，利用真空作用将转膜缓冲液从上层容器中通过凝胶和滤膜抽到下层真空室中，同时带动核酸片段转移到凝胶下面的尼龙膜或硝酸纤维素膜上。 真空转移法 30~60分钟 （3）电转法 利用电场的电泳作用将凝胶中的DNA转移到固相支持物上。特别适用虹吸转移法不理想的大片段的转移。 电转移法使用的滤膜有一定的限制，只能用尼龙膜或化学活化膜，不能用硝酸纤维素膜。 电转移法 不宜用硝酸纤维