3种黄芩黄酮物质体外抗弓形虫效果比较试验.pdfVIP

第 34卷 第 1期 延 边 大 学 农 学 学 报 Vo1．34No．1 2012年 3月 JournalofAgriculturalScienceYanbianUniversity M ar．2O12 3种黄芩黄酮物质体外抗弓形虫效果比较试验 王韵篪， 鞠玉琳 ， 姚琳 (延边大学农学院，吉林 延吉 133002) 摘要：为探讨黄芩中主要成分对 弓形虫的抑制效果 ，利用 MTT法对黄芩乙醇提取物、黄芩苷、黄芩素进行体 外抗 弓形虫作用比较试验。结果表明：3种物质均能有效地抑制 弓形虫的生长繁殖，其中黄芩素的抗虫效果 最好，黄芩乙醇提取物次之，黄芩苷最弱，即黄芩黄酮主要物质中，黄芩素体外抗虫作用最好。 关键词：黄芩提取物 ；体外培养；弓形虫；MTT；抗虫比较 中图分类号：$859．1 文献标识码 ：A 文章编号：1004—7999(2012)01—0075—04 弓形虫病 (Toxoplsmasis)的防治问题一直受到人们 的重视 ，探索治疗 弓形虫病 的药物，也同样是学者 们研究的热点课题 。中药黄芩 (ScutelIariabaicalensis)作为常用 的一味中药 ，经研究证实其有效成分主要 是黄酮类化合物 经报道 ，黄芩水煎剂在体外具有一定的抗 弓形虫作用 。本研究以黄芩 乙醇提取物、黄 芩苷及黄芩素3种黄芩黄酮物质进行抗 弓形虫 的体外试验 ，期望找出黄芩黄酮中抗弓形虫的主要成分 ，为黄 芩的进一步研究和开发提供理论依据。 1 材料与方法 1．1 材料 1)试剂 黄芩 (吉林省龙井市中成药店)；黄芩素、黄芩苷标准品(四川省维克奇生物科技有限公司)；芦 丁标准品(Sigma)；DMEM干粉 (GIBCO)；胰蛋 白酶 (四季青有限公司)；胎牛血清 (天津灏 阳生物有限公 司)；MTT(Sigma)；二 甲基亚砜 (DMSO)(Amresco公司进 口分装)。 2)仪器 NU-5500E二氧化碳培养箱 (NUAIR)；TE2000一S型倒置显微镜 (Nikon)；RE一52AA旋转蒸 发仪 (上海亚荣生化仪器厂)；ST360酶标仪 (上海科华实验系统有限公司)；电子天平 (上海精科天平)；TGL- 16L高速水平离心机 (珠海黑马医学仪器有限公司)等。 3)细胞及虫株 非洲绿猴 肾细胞 (Vero)由哈尔滨兽医研究所提供 ；弓形虫 RH株由日本带广原虫病研 究所惠赠 ，实验室液氮保存 。 1．2 方法 1)供试品的制备 黄芩烘干、粉碎为黄芩粉末，干燥至恒重，固液 比 1：12，加入 6O 乙醇，浸泡 30min，在 85℃下灭酶 2min，在 2KHz超声波下 6O℃处理 2次，每次 30min，合并上清液，旋转蒸发出酒 精 ，得浸膏。黄芩醇提物 、黄芩苷、黄芩素标准品，使用前均用含 10 胎牛血清的DMEM培养基稀释至适当 浓度 ，再用 0．22 m微孔滤膜过滤除菌，备用。 2)弓形虫的培养和分离 按照文献I3的方法进行 弓形虫的复苏和传代培养，计数虫体个数，调整虫体 个数为 5×10个 ／mL。 3)3种物质对 Vero细胞毒性试验 使用 MTT法 ，每种物质设试验组、阳性对照组和空白对照组 (不加 细胞组)。设 5个浓度梯度 (表 1)，以2倍 比进行稀释，各设 5个重复孔。培养时间为24和48h，倒置显微镜 下观察 。在 OD。。／0D。。。nm处双波长测量各孔的吸光值 。以5孔平均值表示 Vero细胞增殖情况 ，计算各 浓度下Vero细胞增殖率，试验根据美国药典中关于细胞相对增殖率与细胞毒性分级评价表为标准，以24和 收稿 日期 ：2011—12—01 基金项 目：国家 自然科学基金项 目 作者简介 ：王韵篪 (1986一)，女，吉林吉林人 ，延边大学农学院，在读硕士 。鞠玉琳为通讯作者 ， Tel：0433—2435537，E～mail：ylju@ybu．edu．cn 76 延 边 大 学 农 学 学 报 第 34卷 48h增殖率均在 9O％以上的浓度 ，定为安全浓度 ，用于体外抗 弓形虫实验。增殖率计算方法：增殖率／％一