白毛黑眼兔眼部虹膜Trp1、Trp2基因克隆与分析.pdfVIP

2012年 4月 中国实验 动物学报 April，2012 第 20卷 第 2期 ACTA LAB0RATORIUM ANIMALISSCIENTIA SINICA VoI．2O No．2 白毛黑眼兔眼部虹膜 Trpl、Trp2基因克隆与分析 朱亮，蔡月琴 ，屠珏 ，陈民利 (浙江中医药大学动物实验研究中心／比较医学研究中心，杭州 310053) 【摘要】 目的 克隆 日本大耳 白兔 白毛黑眼系 (白毛黑眼兔)眼部虹膜 Trpl、Trp2基因，获取其完整的外显子 序列。进一步推测这两个基因编码的蛋 白，并分析其特征。方法 从 白毛黑眼兔的黑色虹膜组织中提取RNA，并 反转录成 cDNA。利用来 自小鼠、大 鼠和人的同源引物 ，扩增获得 白毛黑眼兔 Trpl、Trp2基因外显子片段。然后对 已知片段进行 3’RACE和 5’RACE，从而获得 白毛黑眼兔 Trial、Trp2基 因外显子完整序列 。利用相关软件对获得 序列进行翻译和分析 。结果 首次获得了白毛黑眼兔 Trpl、Trp2基 因外显子全序列 。该实验兔 Trpl基 因的编码 序列全长 1604个碱基 ，其核苷酸序列与人 的相似度为87．9％，与小 鼠的相似度为82．7％。TRP1成熟蛋 白包含513 氨基酸 ，氨基酸序列与人 的相似度为89．8％，与小 鼠的相似度为 86．6％。该实验兔 Trp2基 因序列全长 1554个碱 基 ，其核苷酸序列与人的相似度为 83．2％，与小 鼠的相似度为 81．9％。TRP2成熟蛋 白包含 494个氨基酸 ，其序列 与人 的一致度为 84．2％，与小 鼠的一致度为 84．4％。结论 本研究获得 的TRP1、TRP2的序列与已知的家兔酪氨 酸相关蛋 白家族成员 TYR的序列进行 比对 ，结果显示这三种蛋 白之间有较高的相似度 ，并且 TRP1和 TRP2蛋 白序 列表现 出了酪氨酸酶家族结构上的保守性和特有 的结构特征。 【关键词】 白毛黑眼兔；酪氨酸相关蛋 白1；酪氨酸相关蛋 白2 【中图分类号】Q95-33 【文献标识码】A 【文章编号】1005-4847(2012)02-0043—06 Doi：10．3969／j．issn．1005-4847．2012．02．009 Cloningand analysisofTrplandTrp2 genesfrom whitehairblackeyesrabbitiris ZHU Liang，CAIYue—qin，TU Jue，CHEN Min-li (LaboratoryAnimalResearchCenter，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，China) 【Abstract】 0bjective ToisolateandobtainthecompletesequenceofTrplandTrp2genesfromwhitehairblack eyes(WHBE)rabbitiris，whichrepresentthesecondandthirdmembersofthetyrosinase—relatedgenefamily。andtoiden— tifythesequencesofproteinTRP1andTRP2．M ethods TheWHBE rabbitiriswholemRNA wasreverselytranseriptedto cDNA．ThecDNA wasisolated rfom mouse，ratandhumanusinghomologousprimers．Thefragmentsandcompletese· quencesofthecDNA wereobtainedbyPCR