不同海拔牛皮杜鹃种群遗传多样性的RAPD分析.pdfVIP

第 34卷 第 1期 Vo1．34NO．1 2012年 3月 M ar．2O12 不同海拔牛皮杜鹃种群遗传多样性的RAPD分析 张春影， 赵海佟， 李美善， 许明子， 刘宪虎 (延边大学农学院，吉林 延吉 133002) 摘要 ：利用RAPD标记技术对采 自老 自山和长 白山不同海拔的牛皮杜鹃进行遗传多样性分析。结果表明：产 地不同(长 白山和老白山)的牛皮杜鹃种群间的遗传多样性水平较高，遗传距离较大；而产地相同(长 白山不同 海拔)的牛皮杜鹃种群间遗传多样性水平较低，具有较小的遗传距离，即遗传背景相对相似；长 白山不同海拔 的4个牛皮杜鹃种群还可分为两类。 关键词：牛皮杜鹃；遗传多样性；RAPD 中图分类号 ：Q949．772．3 文献标识码 ：A 文章编号：1004—7999(2012)01～0046—05 牛皮杜鹃(RhododendronChrysanthumPal1．)，别名牛皮茶 ，属常绿无鳞杜鹃花亚属的多年生小灌木。 牛皮杜鹃在我国的分布区域 比较狭窄，主要分布于长 白山海拔 1700～2600m 的岳桦林下和高山冻原带 上，除此之外 ，在黑龙江 、日本 、朝鲜 、俄罗斯也有零星分布。牛皮杜鹃兼具许多优 良特性 ，能抗寒耐风，保持 水土，在维持生态平衡上扮演重要角色。另外，牛皮杜鹃具有较高的观赏价值，其叶大而光亮，花呈淡黄色， 十分悦人眼 目口]，可驯化为观赏花卉 ，是东北稀有的阔叶常绿植物 。因其特殊的生长环境 ，野生资源极为有 限，加之一定的人为破坏因素，导致资源贫乏，现已列入国家级珍稀濒危保护植物Ll1]，濒危系数达 0．7083，保 护现状系数为 0．75L2J。 牛皮杜鹃在我国的研究报导不多_l3q]，人们对其了解不够充分 。一些学者在牛皮杜鹃的组织培养 o] 和解剖学n 方面做 了一些研究，但对其分子水平上多样性的研究报导极少 。 试验主要利用RAPD标记技术对采 自长白山不同海拔和老 白山的牛皮杜鹃群体进行遗传多样性的分 析 ，试图解析遗传分化与环境 因子的关系，为进一步开展牛皮杜鹃分子生物学研究奠定基础。 1 材料与方法 1．1 材料和试剂 1)材料 在长 白山北坡 2570，2381，1982，1788m处和老白山 1695m处共设 5个不同海拔高度的 采样点。每个采样点取 1O株牛皮杜鹃，采集植株上部当年生新鲜完整的幼嫩叶片。各采样点采集 的 1o个 植株间距不小于 20m，以防采集到同一单株的不同地下分枝。采摘的叶片用塑料 自封袋封好 、标记，装入冰 盒 ，运回实验室置于一70℃冰箱中保存备用。 2)试剂 TaqDNA聚合酶 ，DNA ladderMarker，dNTPs，随机引物 (北京欣惠泽奥公司)，CTAB，琼脂 糖 (上海生物工程有限公司)等 。 1．2 方法 1．2．1 牛皮杜鹃基 因组 DNA 的提取 为得到较为纯净的DNA，采用改 良的CTAB法提取DNA口 ，具体流程为：1)取2～3片一7o℃冻存的 叶片，置于具有液氮的研钵 中研磨成粉末 ，再转入 1．5mL的离心管中；2)依次加入 700 L预热 65℃的3× CTAB提取缓冲液和50 L 一巯基乙醇 ，混合均匀后放人 65℃水浴 1h；3)取出后加入 700 L氯仿／异戊醇 (24：1)，振荡成乳状，然后放人离心机中以 12000r／rain离心 10min，吸取上清液导入新离心管中(步骤 3 收稿 日期 ：2012—03—05 作者简介 ：张春影 (1986一)，女，吉林 白城人 ，延边大学农学院，在读硕士 。刘宪虎为通讯作者 ， Tel：0433—2435560，E—mail：liuxh@ybu．edu．cFl 第 1期 张春影 ，等 ：不同海拔牛皮杜鹃种群遗传多样性 的RAPD分析 47 重复 3次)；4)加入 2／3体积的异丙醇 (一2O℃)，于一2O℃冰箱中静置 30rain，出现 白色絮状沉淀时 ， 11000r／rain离心 3rain，取出弃去上清液；5)用 7o 的乙醇洗涤沉淀