抗沙丁胺醇单克隆抗体制备、鉴定与初步应用分析.pdfVIP

摘 要 本研究将沙丁胺醇琥珀酸单酯化后应用混合酸酐法将之与牛血清白蛋白偶联，制 备全抗原后免疫Balb／c小鼠，用杂交瘤技术建立了一株稳定分泌抗沙丁胺醇单克隆抗 体的杂交瘤细胞株，命名为IC2Flo’并对lC2Fio细胞进行了鉴定和抗体应用技术的深 入研究。应用双向免疫扩散方法对1C2Fto抗体进行鉴定，确定1C2FIo抗体属IgGl亚类： 10”I／mol，抗体与克仑特 应用非竞争间接ELISA测定腹水抗体亲合力常数为1．0928X 罗交叉反应为25％，与莱克多巴胺的交叉反应小于O．1％。间接酶联免疫吸附试验测定 细胞上清抗体效价为1：3．2X105，腹水抗体效价为1：6．4×108。秋水仙素阻抑法计算 该细胞染色体数平均为96，体外传代培养和冻存复苏后分泌抗体稳定。 以1C2F·o单抗为基础，对检测B．肾上腺素能兴奋剂的技术路线进行了初步研究， 建立了间接竞争抑制ELISA方法，该方法对沙丁胺醇的最低检出限为lng／ml，对克伦 特罗有一定的检出率，检出限为5ng／ml。添加回收率为90％105％。 I通过与进巳同类试剂盒的初步比较，结果表明，该检测方法基本接近国际同类技 术的检测水平。I，、一 关键词：沙丁胺醇 13-肾上腺素能兴奋剂单克隆抗体免疫分析 and of ElementaryApplication Preparation，Identification Monoclonal Salbutamol against Antibody Postgraduate：QiuYangsheng Genhai Supervisor：Yang Abstract a was fromaBalb／cmouseimmunizedwith Onemonoclonal obtained antibody to serumalbumin． thedirect ofsalbutamolsuccinatebovine by coupling conjugateprepared constantof1．0928×10“1 The and∞affinity mol～，is byIgGlisotype antibody,characterized to whenittested not clenbuterm01．andThe higlllyspecific againstractopamine．，but of 96 cellslinewhich numberchromosomesecretedantibodies hybridoma average steadily ELISAof