鸡IgMμ链在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达.pdfVIP

鸡 IgM µ 链在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达 及其反应原性的测定 ， ， 1 2 3 2 1 赵莉 ，步志高 *，鲍恩东 * （1.南京农业大学动物医学院 南京 210095 ；2. 中国农科院哈尔滨兽医研究所国家重点实验室生物技术 六室，哈尔滨 150001 ； 3.瑞普（天津）动物药业有限公司 天津 300300 ） 摘要：本研究构建了表达鸡 IgM µ 链蛋白的重组杆状病毒rBac-cIgMµ 。采用抗cIgM µ 链蛋白的多克隆抗 体间接免疫荧光检测重组杆状病毒表达的 cIgMµ 蛋白，显示出良好的特异免疫反应原性。以感染 rBac-cIgMµ 的昆虫细胞裂解液上清包被96孔ELISA板，抗鸡IgM µ 链蛋白多克隆抗血清为一抗间接ELISA 检测，同样具有良好的敏感性和特异性。结果表明，重组杆状病毒能良好表达鸡 IgM µ 链蛋白，且其表达 产物具有良好的反应原性。 关键词： 鸡 IgM µ 链； 重组杆状病毒；反应原性 IgM 是机体初次体液免疫应答中最早出现的免疫球蛋白，其在血清中的含量会在首次接 触抗原的几天内达到高峰（杜念兴，1997），然后通过免疫球蛋白类转换作用转变为IgG 而 使其含量逐渐下降（Nossal et al, 1964 ；Coleclough et al, 1980; DePinho et al, 1984 ；Wabl et al, 1978；Yancopoulos et al, 1986 ；Burrows et al, 1983 ）。由于记忆B 细胞并不大量分泌 IgM ， 所以 IgM 的升高预示近期机体内有抗原出现，因此，IgM 在动物疾病的早期诊断方面发挥 着重要作用（杨汉春, 2003 ）。由于目前各类传染病危害严重，迫切需要一种有效的早期诊断 试剂进行快速诊断以控制病情，淘汰感染畜禽，减少损失。本试验利用杆状病毒—昆虫细胞 系统表达了鸡 IgM µ 链蛋白，由于杆状病毒表达系统在外源基因的表达方面具有糖基化、 磷酸化和蛋白切割加工修饰过程，表达产物的理化性质和生物学特性与天然蛋白相似（刘高 强等，2004 ；王清华等，2006 ；董双林等，2006 ；李雪菲等，2005 ），因此用该蛋白包板建 立的间接 ELISA 便于筛选出可以与天然 IgM 表位特异性反应的单抗，从而可为进一步建立 快速灵敏的抗鸡 IgM µ 链诊断试剂盒奠定基础。 1 1 材料和方法 1.1 材料 pFastBac1 （Invitrogen ）供体质粒、sf9 细胞系、DH10Bac感受态细胞（Invitrogen ）均由 国农科院哈尔滨兽医研究所生物技术六室保存和提供；pBlue-cIgM µ质粒、抗鸡IgM µ 链多 克隆抗体均由国农科院哈尔滨兽医研究所生物技术六室制备保存；荧光素（FITC ）标记的 羊抗兔IgG购自北京中杉生物技术公司；辣根过氧化物酶（HRP ）标记的羊抗兔IgG购自Sigma 公司；Grace’s培养基、转染试剂（Cellfectin Reagent ）购于Invitrogen公司；引物（M13 Forward 5，GTTTTCCCAGTCACGAC 3，，M13 Reverse 5，CAGGAAACAGCTATGAC ）由上海博亚 生物工程公司合成。 1.2 原核表达重组 cIgMµ 免疫血清的制备 以 cIgMµ-f 原 (5’CTAGTGAATTCCCCATACAGATGA3’) 和 cIgMµ-r 原 (5’ CTTGCGTCGACCAACACCCAGGAG3’)为引物，以