猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国动物检疫 2008年第 25卷第 11期 一22一 持人：胡藕祥 gdwjy@ i．。m 猪胸膜肺炎放线杆菌 多杀性巴氏杆菌 和副猪嗜血杆菌复合 PCR检测方法的建立 朱 吕昌1l2，陈义平 ’，李明义 1f3，郭玉广 。，马爽 。，周洁 1I2 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032；2．扬州大学兽医学院，江苏扬州 225009；3．青岛易邦生物工程有 限公司．山东青岛266000) 摘要：目的 建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR 检测方法。方法和结果 根据胸膜肺炎放线杆菌的ADX—VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的 168 rRNA基因序列设计5条引物 猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性 巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分 别为342bp，485bp和 1258bp。复合PCR对 1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株 ，6株多杀性巴氏杆菌标准株 。1—15 型副猪嗜血杆菌以及 25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分 离株的基因组DNA作为模板进行检测 ．均获得预 期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等 14种常见细菌作为阴性对照进行 PCR检测．结果仅有支气管 败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物 复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性 巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为 14pg、34pg和 37pg。结论 本研究建立的复合PCR特异性好 ，敏感性高， 可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测 关键词 ：猪胸膜肺炎放线杆菌：多杀性巴氏杆菌：副猪嗜血杆菌；复合PCR 中图分类号：8852．61 文献识别码：A 文章编号 ：1005—944X(2008)11—0022—04 Developmentofamultiplex PCR assay fortheidentication of Actinobacilluspleuropneumoniae，Pasteurellamultocida and Haemophilusparasuis ZhuLu-chang 0,ChenYi-ping ，LiMing—yi ，GuoYu-guang ，MaShuang3 ZhouJie12 (1．ChinaAnimalHealth EpidemiologyCenter，Qingdao266000，China；2．VeterinaryCollegeofYangzhouUni- versity，Yangzhou225009，China；3．QingdaoYebioBioengineeringCO．，Ltd，Qingdao266000，China) Abstract：Objective TodeveloparapidandqualifieddiagnostictestforidentificationofActinobacilluspleurop- neumoniae，Pasteurellamuhocida and Haemophilusparasuis．Methodsand Results A multiplex PCR assay was developedusingprimersderived from Apx——VIA gene sequenceofActinobacilluspleuropneumoniae and 16SrRNA genesequencesofPasteurellamuhocidaandHaemophilusparasuis ．ThePCR assay correctly identified allthe 12 serovarsofActinobacilluspleuropneumoniae，the 14 serovarsofHaemophilusparasuis，6Pasteurellamuhocidastan— dard strainsand 25 clinicalisolates．14 otherbacteiralspeciescommenly isolated from pigswerealso tested．Re—