转基因何首乌毛状根对8种活性成分的生物转化研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 China Biotechnology，2008，28(4)：78 81 转基因何首乌毛状根对8种活性成分的 生物转化研究米 严春艳 马伟丽 梁 建 吕华，中 张德志 于荣敏 (1广东药学院药科学院 广州 510006 2暨南大学药学院 广州 510632) 摘要 目的：利用转基因何首鸟毛状根悬浮培养体系对青蒿素等8种活性化合物进行生物转化研 究。方法：分别向预培养9 d的何首鸟毛状根培养体系中加入底物，共培养7 d后终止转化，通过 TLC和／或HPLC检测转化产物，使用柱色谱法分离纯化产物。结果：化合物呋喃橐吾酮(6)发生 了生物转化，并分离得到两个转化产物；对苯二酚(7)被转化，分离并鉴定出1个转化产物；青蒿 素(8)发生了转化，分离得到两个转化产物。结论：转基因何首鸟毛状根悬浮体系中存在多种生 物酶系统，可对外源底物进行糖基化、氧化、还原和羟基化修饰。 关键词 转基因何首鸟 毛状根 生物转化 中图分类号 S 567 生物转化是利用生物体系的酶系统对加入的外源 1 材料与方法 性底物进行结构修饰的一种方法。其实质是酶催化反 应 J。它具有反应选择性强、反应条件温和、副产物 1．1 仪器与试剂 少、不造成环境污染和后处理简单以及可以进行传统 LDZX40BI型立式自动压力蒸汽灭菌锅，上海申 有机合成所不能或很难进行的化学反应等优点 。生 安医疗器械厂；HZQ-QX全温振荡器，哈尔滨东联电子 物转化与化学修饰相比，有着独特的优势：利用生物体 技术开发有限公司；雷磁pHS~5数显pH计，上海精密 对于底物作用的不确定性，可以充实新化合物的资源， 科学仪器有限公司；EYELA旋转蒸发仪，上海爱朗仪 从中找到有活性的先导化合物，从而进行新药的研究 器有限公司；SGW X-4显微熔点仪，上海精密科学仪器 与开发；此外，利用生物体对于底物作用的多样性，尚 有限公司；高效液相色谱(HPLC)仪：Agilent 1200系 可获取一些化学合成难以得到的活性化合物。 列，自动进样器及DAD检测器；色谱柱：Phenomenex C18 本研究组利用发根农杆菌的Ri质粒浸染植物何首 (51~m，4．6×250 mm)，美国菲罗门公司；Bruker 乌(Polygonum multifl~rum Thunb．)的无菌苗诱导得到 Advance 400 MHz核磁共振波谱仪，Bruker公司；色谱 转基因毛状根(hairy root)。毛状根具有生长快速、加 甲醇、乙腈，江苏汉邦试剂有限公司。薄层层析(TLC) 倍时间短以及遗传和生化稳定等特点。本实验在前期 硅胶，青岛海洋化工厂。 工作 -4 的基础上利用何首乌毛状根悬浮培养系统对 1．2 底 物 青蒿素等8种活性化合物进行生物转化实验，研究该 作为生物转化底物的8种活性化合物名称及纯度 体系生物转化的可行性及特性。并试图确定其转化路 见表1。 线及相关转化产物，为活性化合物结构修饰探索新 1．3 何首乌毛状根的诱导 何首乌毛状根由本研究组诱导获得H 。发根农杆菌 途径。 在YMB固体培养基中培养，用前活化并接种于YMB液 体培养基中。将何首乌无菌苗的叶片与繁殖16 h的菌 收稿13期：2008-01-03 修回日期：2008-02-05 广东省自然科学基金资助项目 液共培养20 min，将感染后的叶片固定在含有头孢噻肟 }★通讯作者，电子信箱：tyrm@jnil．edu．CII