粉防己素及厚朴酚抑制嗜中性白血球黏著及减轻大白鼠心脏缺血再灌注性伤害之作用机转研究.pdfVIP

粉防己素及厚朴酚抑制嗜中性白血球黏著及減輕大白鼠心臟缺血再灌注性傷害之作用機轉研究 沈郁強 藥理學研究所 關鍵詞 嗜中性白血球粉防己素厚朴酚黏著巨噬細胞黏著分子活性氧屬自由基細胞內鈣離子心臟缺血再灌注性傷害 摘要 多形核嗜中性白血球 簡稱嗜中性球 ，是宿主對抗致病原入侵之重要防禦者，其過度活化會 導致棘手之發炎疾病。一系列致發炎物質可活化嗜中性球，釋出活性氧屬自由基 及蛋 白分解�以殺死外侵之致病原，但嗜中性球過度釋放卻是造成心臟缺血再灌注性組織傷 害 之主因。基於嗜中性球對發炎之進行舉足輕重，本論文首先建立體外急性發炎 模式以人類嗜中性球誘發其黏著 篩選出具抗發炎潛力之中藥成份，發現粉防己素 及厚朴酚 效果最佳，隨即進行抗發炎作用機制探討。因厚朴酚對大白鼠 之傷害具保護作用，但機轉並不清楚。經體外發炎模式研究，以誘發嗜中性球黏著於 纖維蛋白原 覆蓋之細胞培養盤，發現厚朴酚可以抑制此黏著現象，續於流式細胞 檢測分析 中得知誘發嗜中性球黏著分子表現增加，且釋放大量 ；嗜中 性球預處予厚朴酚可抑制增加及釋放，效果與超氧歧化� 及過氧化氫� 相當；因此厚朴酚對大白鼠傷害之保護作用，係因厚朴酚抑制嗜中性球產生及蓄積， 而抑制增加，繼而阻止嗜中性球黏著及後續發炎反應所造成之心肌細胞傷害。基於前述 體外抗發炎研究模式之成功建立，乃深入探討粉防己素之抗發炎藥效及藥理機轉。利用前述 細胞實驗，粉防己素可依劑量增加而抑制及誘發之嗜中性球黏著於纖維蛋白原及人類 臍靜脈內皮細胞 。進一步研究確認此黏著作用與「產生」及「鈣離子內流」密切相 關，因此二現象皆造成表現增加，而粉防己素可抑制此二現象，故能抑制嗜中性球 依賴之黏著作用。由於蛋白激� 扮演細胞黏著訊息傳遞之中軸角色 ，經本研究之酵 素磷酸化活性分析，發現粉防己素可抑制汎 之活性，但對 因活化而轉移 到細胞膜之現象卻不能抑制，因此另有它種亞型涉及粉防己素抑制黏著之機轉。 細胞內肌動蛋白之聚合 乃嗜中性球活化及移動之基礎 ，本研究發現粉防己 素亦可抑制嗜中性球之聚合 ，顯示粉防己素抗發炎之作用與抑制肌動蛋白聚合作用密 切相關。基於粉防己素具有抑制體外嗜中性球活化之作用，又傷害與嗜中性球過度活化 密切相關，本研究隨即以動物傷害模式進一步評估粉防己素於活體之療效。經結紮冠心 動脈之大白鼠可造成心室心律不整、心肌梗塞及嗜中性球浸潤等傷害之徵象，部分動物 且因而死亡 。於結紮前靜脈注射粉防己素，發現明顯抑制傷害之徵象，且沒有動物因而 死亡 。配合活體外 分析動物結紮前及後血液循環中之嗜中性球，發現經後之 嗜中性球有明顯優質化現象 ，包括顆粒度增加 、細胞形狀變大及表現增加，且後 續對誘發之釋放及黏著作用皆明顯增強。動物結紮前給予粉防己素預處理則顯著抑制 此優質化現象及後續對誘發之反應。因此粉防己素保護動物免於遭受傷害之可能機轉 是經由抑制嗜中性球因優質化致過度活化所造成之大量產生及黏著增加而致組織嚴重浸潤 之結果。總述本論文之研究結果 ：厚朴酚及粉防己素皆可透過抑制嗜中性球產生，而抑制 表現及黏著作用，達其抗發炎作用。活體傷害模式證實粉防己素對動物確實具保護作 用，經活體外嗜中性球檢測，證明粉防己素於活體內同樣可抑制嗜中性球之活化，因此厚朴 酚及粉防己素皆很有潛力開發為臨床上急性心肌梗塞這類發炎疾病之預防甚或治療之用。