重组虹鳟ifn-γ2的原核表达及抗ihnv活性分析.pdf

第 40 卷 第 10 期 水 产 学 报 Vol. 40, No. 10 2016 年 10 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Oct., 2016 文章编号: 1000–0615(2016)10–1586–09 DOI: 10.11964/jfc.20150810013 重组虹鳟IFN-γ2的原核表达及抗IHNV活性分析 1, 2 1 1 1 2 1 * 曹永生 ， 徐黎明 ， 赵景壮 ， 刘 淼 ， 张奇亚 ， 卢彤岩 (1. 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070; 2. 中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北 武汉 430072) 摘要：为获得虹鳟IFN-γ2(rtIFN-γ2)抗传染性造血器官坏死病毒(IHNV)活性的相关数据， 实验根据NCBI 已发表序列设计引物，提取经植物血凝素刺激后的虹鳟头肾细胞总 RNA ，采用RT-PCR方法扩增471 bp 的该基因完整开放阅读框。将该基因重组至原核表达 载体pET32a 中，并转化大肠杆菌Rosetta ，进行诱导表达，SDS结果显示，目的蛋 白以包涵体形式表达，大小约为38.4 ku 。重组蛋白经复性、纯化后在CHSE-214细胞上进 行抗IHNV 活性分析，结果显示，rtIFN-γ2 在CHSE-214 细胞上抗IHNV 活性为6.63×106 U/mg 。Real-time PCR 结果显示，rtIFN-γ2 免疫后，虹鳟头肾、脾、肝中IRF-1 、IRF-2 、 IFN-I 、IFN-γ和Mx表达水平均显著提高，总体而言免疫后2 天机体抗病毒状态弱于免疫 后1天。攻毒保护实验结果显示，免疫后1天进行IHNV攻击时，鱼死亡率为40% ，而免疫 后2 天进行IHNV攻击时，鱼死亡率达到80% 。研究表明，原核表达系统制备的重组虹鳟 IFN-γ2 不仅具有体外抗IHNV 活性，更能激发虹鳟的抗病毒状态，从而为虹鳟抵抗 IHNV感染提供一定的保护力。 关键词: 虹鳟IFN-γ2 ；原核表达；抗IHNV活性；抗病毒状态；保护率 中图分类号: Q 785 ；S 917.4 文献标志码: A Ⅱ型干扰素即IFN-γ ，在不同物种之间同源 核酸疫苗免疫后，IFN-γ2 的上调比IFN-γ1更为明 [5] 性较低，决定了IFN-γ生物学作用具有较高的种 显 。这意味着虹鳟IFN-γ的这两个亚型在机体抵 属特异性，同时显示出尽早开展鱼类IFN-γ相关 抗病毒过程中的反应性和有效性可能存在一定 [1] 工作的必要性 。IFN-γ不仅是一种安全、有效的 的差异，然而关于IFN-γ2 的抗病毒活性的相关数 [2] 抗病毒制剂，同时还是一种天然的免疫增强剂 。 据还比较缺乏。 IFN