利用大孔径酰胺固定相进行hilic糖肽图分析 - waters.pdf

[ 应用纪要 ] 利用大孔径酰胺固定相进行HILIC糖肽图分析 Matthew A. Lauber和Stephan M. Koza 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 简介 ■ 1-2 为传统反相(RP)肽图提供正交选择性， 生物制药的肽图分析被长期用作鉴别测试和监测特定残基修饰的工具 。 改善对亲水性蛋白质修饰(例如糖基 在传统分析中，利用C 键合固定相并使用离子对试剂的反相(RP)分离 18 化)的表征 的极高峰容量分离由高精度蛋白酶(如胰蛋白酶和Lys-C)得到的肽。 ■ 业内领先的IgG糖蛋白HILIC分离，可用于 此类分离能够分辨单个氨基酸(例如天冬酰胺)的差异，从而分离肽； 解析修饰位点 并且能够分辨天冬酰胺脱酰胺化的两种潜在产物天冬氨酸和异天冬氨 3-4 ■ 可兼容MS的HILIC能够详细研究样品成分 酸 。 ■ 增强的糖基信息可补充RapiFluor-MS游离 然而，并非所有的蛋白质修饰都可以如此轻松地通过RP分离得到分辨。 N-糖分析 相比之下，糖基化肽分离的选择性相对较差，特别是考虑到糖肽异构 体的糖基质量数通常仅相差大约10至2000 Da。因此，尽管RP分离有利 ■ Glycoprotein BEH Amide 300Å 1.7 µm糖蛋白 分析固定相通过了糖蛋白分离的质量 于通用肽图分析，但其分辨亲水性修饰的能力有限。此前的研究证明， 控制测试，可确保批次间具有一致的 利用酰胺键合固定相的亲水作用色谱(HILIC)可实现糖基化肽的互补性 重现性。 5-6 高分离度分离 。这些研究证明，酰胺键合固定相对于这些分离尤其 7 有效，因其具有亲水性且易于形成氢键，因此具有高保留性 。 通过对该技术进行扩展，我们开发出一种标称孔径较大的酰胺键合固 定相(所谓的“大孔径”填料)，使得酰胺HILIC分离可通用于分离完整糖蛋 白和消化糖蛋白的糖型。ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide 300Å 1.7 m 糖蛋白分析专用柱采用的这一固定相能够使无论尺寸如何的糖肽都能 沃特世解决方案 8-9