盐生杜氏藻cpd光裂合酶fad结合结构域gln336在逆境胁迫下的修复 .pdf

2017-04-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2016.05035 / Chin J Appl Environ Biol 2017 23 ( 2 ) : 0238-0243 应用与环境生物学报 ， 盐生杜氏藻CPD光裂合酶FAD结合结构域 Gln336在逆境胁迫下的修复活性* 姜腾飞 王雨昊 唐滋一 黄国印 徐 辉 乔代蓉 曹 毅** 四川大学生命科学学院，微生物与代谢工程四川省重点实验室 成都 610065 摘 要 为了解盐生杜氏藻环丁烷嘧啶二聚体（CPD）光裂合酶的作用机制，通过定点突变的方法对其黄素腺嘌呤二核 FAD α13 Gln336 PGEX-4T-1-DsPHR2 WT 苷酸（ ）结合结构域 中保守氨基酸残基 进行突变，并比较野生型菌株 （ ）和突变 PGEX-4T-1-DsPHR2-Q336H Q336H 菌株 （ ）表达的光裂合酶在体内外的光修复活性及其在不同盐浓度下修复光损伤的 效果. 结果显示：采用Dpn I法定点突变，成功获得盐生杜氏藻CPD光裂合酶突变体Q336H的基因，构建表达载体并导 BL21 DE3 Q336H CPD 入到大肠杆菌 （ ）中，构建了突变菌株 . 体内外活性研究发现，野生型菌株的 光裂合酶的活性显著 Q336H P 0.05 Q336H 大于突变菌株 （ ）. 在不同盐浓度条件下，野生型菌株存活率基本没有变化，而突变菌株 随着盐 浓度增加存活率迅速下降. 在体外修复实验中，甘油浓度对突变酶 Q336H活性影响显著大于对CPD光裂合酶活性影响 P 0.05 Q336H CPD （ ）. 甘油浓度增加导致突变酶 修复活性逐渐下降，而 光裂合酶活性变化趋势是先增加后下降. 因 Gln336 CPD 此， 对盐生杜氏藻 光裂合酶活性具有重要影响，而且可能是该酶在盐胁迫下发挥功能的关键氨基酸残基. 9 18 （图 参 ） CPD FAD 关键词 光裂合酶；作用机制； 结合结构域；保守氨基酸；盐生杜氏藻 CLC Q55 : Q949.212.06 Repair activity of Gln336 on the FAD binding domain of CPD photolyase in Dunaliella salina under stress*