抗原抗体的检测.ppt

（2）双向免疫扩散 Ag Ab 将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，抗原抗体会自由地向四周扩散，在它们相遇的位置形成一条沉淀线。是一种定性检测法。 Ag1 Ag1 Ab1 Ag1 Ag2 Ab1、2 Ag1 Ab1、2 Ag1、 2 对流免疫电泳？ （3）免疫电泳 （4）免疫比浊 待测Ag Ab槽 已知Ag + - Ag2 Ag3 Ag1 Ag’ 根据不同量抗原抗体反应所形成的浊度不同判断样品中未知抗原的含量。 3 、免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光素、酶、放射性核素、胶体金或化学发光物质等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行抗原抗体检测。 可见 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 优点:灵敏度高、快速、可定性、定量、定位。 分类：根据标记物的不同，免疫标记技术可分为免疫荧光技术、免疫酶技术、放射免疫技术、胶体金和化学发光技术。 胶体金 （1）免疫荧光技术 常用荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）和藻红蛋白（PE）。 直接法 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 间接法 冲洗 冲洗1 冲洗2 可通过荧光显微镜或流式细胞仪观察荧光。 （2）免疫酶技术 将抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的高效性相结合,通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。常用方法:酶标免疫组化法及酶联免疫吸附法等 常用标记酶:辣根过氧化物酶(HRP) 邻苯二胺 HRP 催化 显黄色 E E Ag OPD Ab HRP 酶联免疫吸附试验(ELISA) 双抗体夹心法 间接法 将抗原抗体反应在固相上进行,通过洗涤除去游离成分.目前是应用最广的免疫酶技术。 E E 待测为抗原 待测为抗体 冲洗 （3）放射免疫技术(RIA) 定义：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫检测的方法。 常用标记物：125I和131I 特点：灵敏度高（pg），故用于测量微量物质，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛、IgE等。 但放射性核素有一定危害性，使得放射性免疫激素的应用受到一定限制。 免疫学测定方法敏感性比较 测定方法 敏感性（每升） 单向免疫扩散试验 ＜1～2mg 双向免疫扩散试验 ＜1mg 火箭电泳 ＜0.5mg 对流电泳 ＜0.1mg 免疫电泳 ＜5～10mg 凝集试验 1μg 被动血凝试验 1μg 血凝抑制试验 0.1μg 补体结合试验 0.1μg 放射免疫分析法 ＜1pg 酶联免疫吸附试验 ＜1ng 定量免疫荧光分析 ＜1pg 示教1：免疫沉淀反应 1.单向琼脂扩散干板 2. 双向琼脂扩散干板 3.火箭电泳干板 4.对流免疫电泳干板 * 示教2：细菌的凝集试验 ? ?原理：细菌是颗粒性抗原，与相应抗体结合后形成凝集团块，此类反应称为直接凝集反应。 操作： 生理盐水 生理盐水 可疑病原菌 可疑病原菌 沙门氏菌属多价O血清 志贺氏菌属多价血清 实验操作1：双抗夹心法检测特定抗原 检测抗原最常用ELISA， 适用于检测具有至少两个抗原决定簇的多价抗原。? ?? ? 原理： 1、利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。 2、复合物的形成量与待测抗原的含量成正比。 3、测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物的量(OD值)，即可确定待测抗原含量。 双抗夹心法 （sandwich ELISA） 抗原抗体反应及免疫学标记技术 生物病原与免疫学系 医学免疫学 实验二 主要内容 讨论： 第一节 抗原抗体反应概述 概念、原理、特点及影响因素 第二节 抗原抗体反应类型 示教： 单向琼脂扩散干板、双向琼脂扩散干板、 火箭电泳干板、对流免疫电泳干板 细菌的凝集实验 操作： 夹心ELISA检测特定抗原HBsAg 胶体金试纸检测HCG 抗原抗体反应原理 抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)。 抗原抗体反应概念 抗原抗体结合反应是抗原决定簇和抗体分子超变区之间的相互作用，是一种分子表面的特异的可逆的弱结合力。这些弱结合力只能在极短距离内才能发生效应。 第一节 抗原抗体反应概述 抗原抗体结合力 抗原和抗体的结合具有互补性，是通过非共价键进行特异性结合，抗原与抗体这种弱的结合力涉及下列几种分子间的作用力： l.静电引力 2.范德华引力 3.氢键结合力 4.疏水作用力 抗原抗体反应的特