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麦穗鱼囊胚细胞的分离与冷冻保存 - 广东农业科学
124 广东农业科学… 2015年第24期
麦穗鱼囊胚细胞的分离与冷冻保存
方 晨，王 霞，王 伟，龚良超，刘 学，罗昌妃，张小雪
（贵州大学动物科学学院，贵州…贵阳………550025）
摘 要：为了探讨麦穗鱼囊胚细胞的分离方法及其较佳的冷冻保存条件，采用胰蛋白酶酶解法和低温冷
冻保存技术对麦穗鱼囊胚细胞的分离和保存进行研究。结果显示，20℃微流水条件下，受精后120…min左右
麦穗鱼胚胎发育达到囊胚期；25℃条件下，0.25%胰蛋白酶作用12~18…min，麦穗鱼囊胚细胞即可脱去胚胎
膜，且所获的囊胚细胞存活率可达90%以上；10%DMSO+DMEM作为冷冻储存保护液，储存于-80℃超低温
冰箱中8…d，囊胚细胞存活率保持在50%以上；储存于-196℃，8…d后囊胚细胞存活力可达70%以上，储存
128…d后，细胞存活率仍可保持60%以上。表明25℃、0.25%胰蛋白酶作用是较好的麦穗鱼囊胚细胞卵膜去膜
条件，10%DMSO+DMEM保护液、细管和液氮（-196℃）保存囊胚细胞128…d可保持其有60%以上的存活率。
关键词：麦穗鱼；囊胚细胞；分离；冷冻保存
中图分类号：S917.4… … … … … 文献标识码：A… … … … … 文章编号：1004-874X（2015）24-0124-05
Isolation and cryopreservation techniques of
Pseudorasbora parva blastomeres
FANG…Chen，WANG…Xia，WANG…Wei，GONG…Liang-chao，
LIU…Xue，LUO…Chang-fei，ZHANG…Xiao-xue
（College of Animal Sciences ，Guizhou University ，Guiyang 550025 ，China ）
Abstract ：To…study…the…isolation…and…suitable…cryopreservation…of…Pseudorasbora parva blastomeres，comparison…
experiments…were…conducted…in…taking…off…the…egg…membrane…of…P. parva…blastula…with…different…concentrations…of…trypsase…
at…25℃，and…in…cryopreservation…for…P. parva blastomeres…with…different…protectants…and…at…different…temperatures.…Results…
showed…that…the…blastula…stage…of…P. parva was…achieved…in…120…min…after…fertilization，under…the…condition…of…microstream…
at…20℃.…It…took…12-18…min…to…take…off…the…egg…membrane…with…0.25%…trypsase…at…25℃，furthermore，the…survival…rate…of…
isolated…blastomeres…was…above…90%.…10%…DMSO+DMEM…was…used…as…a…tprotectant…at…-80℃，the…blastomeres…survival…
rate…was…above…50%…after…8…d；at…-196℃，the…survival…rate…was…above…70%…after…8…d，and…the…survival…rate…was…also…above…
60%…after…128…d.…The…r
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