家畜传染病学实验指导：马副伤寒的实验室诊断 免费.docVIP

实验二十八 马副伤寒的实验室诊断 目 的 掌握马副伤寒的细菌学及血清学诊断方法。 内容及方法 细菌学诊断 1．病料采集和镜检 流产胎儿的胃内容物及其实质脏器如肝、脾；羊水及胎膜；流产 母马的膣腔和子宫分泌物；病马关节液、．脓肿及脓汁。所取的病料可直接制成涂片或触片， 用普通染色法或革兰氏染色镜检。在视野可见到集簇状态，着色不均，革兰氏阴性小杆菌。 但杂菌较多时，难于与其他细菌区别。 2．培养 将采取的病料直接培养和增菌培养同时进行。如胃内容物、脏器等，直接用 S．S培养基或远滕氏琼脂平皿作分离培养。若在平皿培养基上出现无色的可疑菌落时，可用沙门氏杆菌A—E组多价O血清做玻片凝集试验。 每个平皿至少挑出三个可疑菌落，分别培养于三糖铁培养基上，凡斜面和底层均呈黄 色的(即发酵乳糖、蔗糖及葡萄糖)，或斜面和底层均呈原来的红色(即不发酵乳糖、蔗糖及葡萄糖)，不是沙门氏杆菌，应予淘汰。凡斜面红色、底层黄色；有或无动力和硫化氢；产气或不产气，均符合沙门氏杆菌的变化，应进行生化试验和血清凝集试验。本菌的抗原结构，用沙门氏杆菌因子血清与分离菌做凝集试验时，为4，12：一，e，n，x。用马流产副伤寒杆菌标准阳性血清与分离菌做试管凝集反应时呈现阳性。本病检验程序和马副伤寒杆菌生化特性见表34。 3．动物试验 将本菌培养物0.5ml，给小鼠腹腔接种，经48h死亡；皮下注射，则经 5～6天死亡。以同样剂量给家兔注射，则经7天死亡；而皮下注射时，家兔可耐过而存活。 接种妊娠小鼠、豚鼠、家兔能引起流产，从死亡实验动物的器官，可分离出马流产副伤寒 杆菌。 二、血清学诊断 流产病马在流产后，血液中出现凝集素，可持续到30天左右，有时可达两个月以上， 而后逐渐降低。因此在流产后8～10天采血检查凝集素，应用试管凝集反应进行诊断。 1．试管凝集反应的材料 (1)新鲜被检马血清 用0.5％石炭酸生理盐水稀释成1：100。 (2)抗原 每毫升含菌200亿，用前作1：20稀释。 2．操作方法及判定 按表35进行操作和判定。 表35 马副伤寒的试管凝集反应 试 管 号 1 2 3 4 5 被检血清稀释倍数 0.5％石炭酸生理盐水 1：100被检血清 1：20抗原 400x 800x 1600x 3200x — 1.0 1.0 1.0 1.0 — 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 弃1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 感 作 在37～38℃温箱中2．5～3h后再移室温放置18～20h 判 定 阴性 可疑 阳性 十十 十十十 十十十 十 十十 十十十 — 十 十十 — — 十 — — — 复习题与作业 1．叙述马副伤寒的细菌学检查的程序。 2．马副伤寒实验室诊断的应用价值。