饲料分析与检测实验：饲料蛋白质溶解度测定 免费.docVIP

实验七 饲料蛋白质溶解度测定 【学习目标】 掌握饲料饲料蛋白质溶解度测定方法，并能测定饲料蛋白质溶解度。 一、原理 本方法适用于大豆饼、粕的加热处理程度的品质检验。 抗胰蛋白酶活性方法可用来测定加热过度的大豆饼、粕，但因其费时，昂贵而未被广泛使用。故现在多采用尿素酶活性这一化学指标，但尿素酶活性只能作为加热至适合程度的评价指标，而对加热过渡的饼、粕却没有任何意义。尿素酶值不能反映受严重热处理的大豆饼、粕的质量。Rinehart发现了采用0.2%KOH溶液测定蛋白质溶解度的方法来评价大豆饼粕的质量，可克服上述尿素酶活性评价工作上的不足。北美一些饲料公司已将蛋白质溶解度(PS)列入质量控制指标之一。生豆饼、粕的PS可达到100%，但随热处理时间的延长，PS值降低，即使严重的过热处理，PS值也未接近零。试验表明，蛋白溶解度更加密切的反映了过熟处理的大豆饼、粕与畜禽生产性能的关系。并进一步提出当PS85%时，为过生；PS70%时，则为过熟。尿素酶活性检测和蛋白质溶解度已成为评定豆饼、豆粕加工质量的两个重要指标。 二、操作方法 （一）试剂配制 1.0.2% 氢氧化钾（KOH），相当于0.042 mol/L，pH 12.5，称取氢氧化钾约0.2g加水溶解，并稀释至100.0ml。 2.其它试剂同凯氏定氮所需的试剂一致。 （1）浓硫酸 分析纯,含量为98.0%，无氮； （2）混合催化剂 CuSO4:无水Na2SO4=1:10，分析纯； （3）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，保存期不超过三个月。此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈蓝色。 （4）2.0%硼酸吸收液 溶解2.0g分析纯硼酸于100.0ml容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml，摇匀备用。 （5）40.0%饱和NaOH溶液 溶解40.0g分析纯氢氧化钠于100.0ml 容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml，摇匀备用。 （6）0.05mol/L HCl标准液 取分析纯浓HCl(比重1.19)4.2ml，加蒸馏水稀释至1000.0ml，用基准物质标定。将优级纯无水Na2CO3基准物于100.0℃干燥箱烘1～2h，干燥器冷却30.0min，准确称取0.0130～0.0150g于三角瓶，加50.0ml蒸馏水溶解，加2滴甲基红指示剂，用预配约0.05mol/L HCl滴定至紫红色，记录HCl用量，计算出HCl的准确浓度，再稀释为所需浓度。 标准HCl 式中：C—HCl的mol/L浓度； W—NaCO3的质量，g； V—HCl的耗量，ml； 稀释公式： 式中：C1—浓溶液的浓度； V1—浓溶液的体积； C2—稀溶液的浓度； V2—稀溶液的体积； （二）操作步骤 1.称取1.5 g大豆饼粕粉（过60目筛）于250.0ml烧杯中，加入75.0ml的0.2% KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20.0min。 2.取50.0ml液体转移至离心管，以2700r/min转速离心10.0min。 3.取15.0ml上清液，用凯氏定氮法测定其中的蛋白质含量，其量相当于0.3g 的原样品。 4.消化 精确取15.0ml上清液于100.0ml凯氏烧瓶，加1.0～1.5g混合催化剂，沿着凯氏烧瓶壁加入10.0ml浓硫酸，将凯氏烧瓶放于通风柜中电炉上消化，为防止消化时液体溅失，可再加两粒玻璃珠，先低温加热防止泡沫浮起，待泡沫消失后，提高加热温度至沸腾。消化时要经常转动凯氏烧瓶，如果有黑色炭粒消化不全，可将凯氏烧瓶取出于沙盘，待凯氏烧瓶完全冷却后，用少量的蒸馏水沿凯氏烧瓶瓶颈壁内壁上黏附少量黑色炭粒于硫酸溶液中，继续消化。消化中途发现硫酸少，可补加少量浓硫酸后继续消化。至溶液完全澄清透明，移出电炉，放于凯氏消化架或沙盘中冷却。 2.转移 将冷却的消化液加少许蒸馏水约20.0ml，摇匀后无损移入100.0ml容量瓶，再用蒸馏水反复冲洗烧瓶数次，直至消化液全部转入容量瓶中，冷却至室温后，再蒸馏水定容至刻度。即为试样分解液或消化液。 3.空白实验 消化的同时另取一个凯氏烧瓶，加入除样品外其它试剂，同样消化至澄清透明，冷却后按同样的方法转移至容量瓶中，冷却后定容至刻度，为空白消化液。 4.蒸馏 按图安装好半微量凯氏定氮仪（见粗蛋白质测定图解），检查冷凝水是否正常。加热蒸汽发生器内的水，待水沸腾后，调节好蒸汽的压力，反复洗净定氮仪反应室，把装有10.0ml 2.0%硼酸溶液的接收瓶置于冷凝管的下方，将冷凝管下端的出口橡胶管插入硼酸溶液内，用被测消化液冲洗10.0ml移液管3次，再用此移液管吸取1