高效液相色谱法 - thermo fisher scientific.pdf

高效液相色谱法 (HPLC) 转换到超高效液相色谱法 技 术 指 (UHPLC) 的通用工具 南 7 5   Holger Franz and Susanne Fabel Thermo Fisher Scientific, Germering, Germany  引言 方法加速策略 随着超高效液相色谱法 (UHPLC) 的商品化，这 在尽可能短的时间内达到足够的分离度是将 项技术的使用呈现出一种持续增长的趋势。这一趋势 HPLC 方法转换为 UHPLC 方法的主要目的。具体做 主要受液相色谱仪器和色谱柱填料的创新驱动。 法是使用更短的色谱柱装填更细的填料。该方法的理 UHPLC 固定相比 HPLC 固定相的粒径更小，低至 论基础是基于各种色谱教科书广泛收载的色谱学理 亚 2 µm 范围，理论塔板和分离度均优于具有相同柱 论。基于下文描述的各种色谱转换公式，Method 长但使用较大粒径的色谱柱。 Transfer Tool 可用于具有相似色谱选择性的全多孔色 谱固定相在 HPLC 方法和 UHPLC 方法间的快速转 通常情况下， HPLC 方法转换成 UHPLC 方法 换。 后，足以维持原 HPLC 方法的分离度，因此，主流的 做法是使用更短的色谱柱装填更小粒径的填料，在保 液相方法的分离效率可用峰容量 P 来表示。峰容 持分离度不变的前提下，提高分离速度。但若要保证 量是指一定时间周期内可分离得到的色谱峰个数，等 流速、进样体积或梯度曲线等参数适合新色谱柱的特 于运行时间除以平均峰宽。因此，较窄的峰宽是快速 性，需要经过相当复杂的计算。Thermo Scientific™ 分离方法获取更高分离效率必不可少的条件。峰宽与 Method Transfer Tool 能简化这些计算过程并且提供 理论塔板数 (N) 平方根的倒数成正比。考虑到柱长， 多语言界面支持。根据现有的 HPLC 色谱参数，自动 分离效率也可用理论塔板的高度 H 来表示。方程 1 计算出 UHPLC 方法所需的最佳色谱参数。 给出了柱长 L 与塔板高度 H 和塔板数 N 的关系。 本文向您介绍了 HPLC 方法向 UHPLC 方法转 方程 1 ： ： 换的相关理论背景和数学方程，同时对 Thermo 式中： Scientific Method Transfer Tool 的使用方法进行了详 细介绍，方便您更熟练地获取计算结果。除了基于梯 N = 塔板数 度延迟体积差异