以hif-1α 和p300 相互作用为靶点的抑制剂筛选模型的建立 - 药学学报.pdf

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 (6): 849 853 ·849 · HIF-1 和P300 相互作用为靶点的抑制剂筛选模型的建立 来芳芳, 牛 非, 杨瀚泽, 周琬琪, 陈晓光* ( 中国医学科学院、北京协和医学院 物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 北京 100050) 摘要: 本研究以HIF-1 和P300 的相互作用为靶点, 设计并构建了基于哺乳动物双杂交体系的HIF-1 特异性 抑制剂筛选方法。通过克隆HIF-1 和P300 相互作用的基因序列, 成功构建重组质粒pBIND-HIF1 和pACT-P300, 进而在 HEK293 细胞中验证了 HIF-1 和P300 蛋白在哺乳动物双杂交体系中确实存在直接的相互作用, 并进一 步优化了模型构建条 。化合物黑毛霉素 (chetomin) 、甲萘醌 (menadione) 在此筛选模型上能抑制其相互作用。 在此基础上, 联合U251-HRE 的HIF-1 转录活性抑制剂筛选方法, 充分肯定了黑毛霉素能有效抑制HIF-1 活性。 因此, 联合哺乳动物双杂交和U251-HRE 这两个细胞模型, 成功建立了以HIF-1 和P300 相互作用为靶点的筛选 模型, 为特异性小分子肿瘤靶向药物的开发奠定了基础。 关键词: 缺氧诱导因子 1- ; P300; 相互作用; 哺乳动物双杂交; 筛选 中图分类号: R965.1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2014) 06-0849-05 Development of a novel screening assay for inhibitors targeting HIF-1 and P300 interaction * LAI Fang-fang, NIU Fei, YANG Han-ze, ZHOU Wan-qi, CHEN Xiao-guang (State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Ac ademy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China ) Abstract : Hypoxia is a general characteristic of most solid malignancies and intimately related to cancer progression. Homeostatic response to hypoxia is primarily mediated by hypoxia inducible factor-1 (HIF-1 ) that elicits transcriptional activity through recruitment P300 coactivator. Targeting the interaction of HIF-