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药理学实验设计及基本技术 从离体筛选到在体研究 第6讲 药理学实验设计 一、实验动物分组原则 (一)对照原则 1、空白对照组：为溶剂或赋形剂组，用于观察不给药（或不处理时）实验对象的反应和指标变化，其目的,一是作为病理模型制造是否成功，实验药物是否有效的比对标准；二是排除假阳性结果。 2、模型对照组：根据药效学研究的目的，制造相应的动物病理模型，并给予溶剂或赋形剂，用于观察具有病理变化的实验对象的反应和指标变化，作为实验药物是否有效的比对标准。 3、阳性对照组：采用药典上记载的或临床公认有效的药物作为阳性药，设置对照组，其目的，一是比较实验药物与临床目前使用药物间的药物效应强度；二是考察实验方法及技术的可靠性；三是排除假阴性结果。 （二）随机原则 随机是减小实验差异的最基本方法，通过随机的方法，将客观存在的各种差异对实验结果的影响降低到最小。药理学实验中，虽然可以通过各种方法控制实验条件，但仍然不可避免由于各种差异造成的影响，特别是在动物实验中，动物间的个体差异是无法排除的客观存在，可通过随机的方法，分配到各实验组中，使这种差异不至于影响实验结果。 在实验过程中实施随机原则，可根据具体实验特点，采用不同的随机方法，实现实验设计和实施过程的随机化。常用的随机分组方法主要有： 1、单纯随机分组法：又称完全随机 （1）、随机数字表法： （2）、计算机随机数字法： 2、简化分层随机分组法：简化均衡随机 3、配对随机分组法： 4、区组随机分组法： 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 随机数字 04 37 60 88 02 03 24 17 97 81 组 别 A B A A A B A B B B 1 1 0 1 2 0 0 2 1 81/4=20…..1 将第2组的1号动物调到第3组 （三）重复原则 重复是保证实验结果可靠的重要措施之一，包括重现性和重复数。重现性指的是，在不同空间与时间条件下，按同样的实验方法和条件，可获得同样的实验结果，只有可重现的结果才是科学可靠的，不能重现的结果可能是偶然现象，没有科学价值；重复数指的是，实验要有足够的次数或例数。在实验中要求有一定的重复数，目的是消除个体差异和试验误差，提高实验结果的可靠性。一般，小动物（如小鼠、大鼠）每组10-30例；大动物（犬、猫、羊、猴）每组5-10例。 （四）单盲和双盲原则 为保证实验结果的可靠性、真实性和科学性，排除研究者或实验对象的主观偏因，实验设计中应依据单盲和双盲原则。单盲试验中，仅受试对象不知道所用的是实验药还是对照药；双盲试验中，受试者、研究者均不知道所用药物是实验药还是对照药，直至试验结束才作统计处理，可排除因主观偏差造成的假阴性或假阳性结论。 二、实验药物的给药方法 给药的途径、制剂、剂量 （1） 如有的激素在肝脏内破坏，经口给药就会影响其效果。 （2）有些中药用粗制静脉注射，因其成分复杂，如含有钾离子，可以有降血压作用，若把这种非特异性降压作用解释为特殊性疗效就不恰当。这类实验结果如果用口服或由十二指肠给药就可鉴别出来。 （3）也有些中药成分在消化道破坏或不被吸收。如枳实中的升压有效成分，对羟福林和N-甲基酪胺只是在静脉注射时才有疗效。 （4）有些中药含有大量鞣质，体外试验有抗菌作用，但在体内不被消化道吸收，则没有抗菌作用。 （5）给药的次数对一些药物也有关系，如雌三醇与细胞核内物质结合的时间非常短，所以，每天一次给药的效果就比较弱，如将一天剂量分为八次给药，则效果将大大加强。 （6）药物的浓度和剂量也是一个重要问题，太高的浓度，太大的剂量都会得出错误的结果。如有用1/2LD50腹腔注射某药物后动物活动减少，认为该药有镇静作用，实际上1/2LD50的剂量已近中毒量，这时动物活动减少，不能认为是镇静的作用。 三、 实验动物用药量的确定及计算方法 　　（一）动物给药量的确定 　　在观察一个药物的作用时，应该给动物多在的剂量是实验开始时应确定的一个重要问题。剂量太小，作用不明显，剂量太大，又可能引起动物中毒致死，可以按下述方法确定剂量： 　　 1．先用小鼠粗略地探索中毒剂量或致死剂量，然后用小于中毒量的剂量，或取致死量的若干分之一为应用剂量，一般可取1/10-1/5。 　 　2．植物药粗制剂的剂量多按生药折算。 　 　3．化学药品可参考化学结构相似的已知药物，特别是化学结构和作用都相似的药物的剂量。 　 　4．确定剂量后，如第一次实验的作用不明显，动物也没有中毒的表现（体重下降、精