（sec） 仪器分析第十八章高效液相色谱法二.ppt

课堂互动 在反相色谱中，如果某组分保留时间较短，且与相邻物质没能达到完全分离，您将如何处理？ 课堂讨论 欲测定的试样为弱极性分子型有机化合物，我们将采用哪种色谱方法？ 牛黄解毒片中黄芩苷（弱酸性）含量测定条件如下固定相：C18 。 流动相：甲醇-水-磷酸（45∶55 : 0.2） 请分析：①该试验采用的是哪一种色谱方法？ ②流动相中为何加入磷酸？ 第二节　高效液相色谱法分离条件的选择 一、HPLC中的速率理论 涡流扩散　A=2λdp 球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。 纵向扩散　β=2γDm 可以忽略。 因为Dl很小，室温操作，且U大于U最佳， HPLC中的速率理论 传质阻抗 固定相传质阻抗CS可以忽略 ，因df极小 流动相传质阻抗Cm 要求： dp小，Dm大 静态流动相传质阻抗 ： 由于部分流动相在固定相微孔内的滞留 静态流动相传质阻抗系数Csm Csm ∝dp2， Csm ∝1/Dm，而Dm∝T/η 要求: 固定相dp2、 流动相η都小 HPLC中的速率理论 H =A + Cmu + Csmu 原因：化学键合相，液体流动相 结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。 HPLC中的速率理论 二、分离条件的选择 (一) 正相键合相色谱法 固定相 极性键合相　如氰基、氨基键合相等 流动相 烷烃加适量极性调节剂 （二）反相键合相色谱法的分离条件 固定相　非极性键合相如ODS 流动相　以水为基础溶剂，加入甲醇、 乙腈等极性调节剂 弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂 加入0.1%~1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用 （三）反相离子对色谱法的分离条件 固定相 尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相， 离子对试剂 离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反 流动相pH　使试样组分与离子对试剂全部离子化 有机溶剂及其浓度 同一般反相HPLC 第三节　高效液相色谱仪 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统 检测系统 数据记录处理系统 一、输液系统 （一）高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。 有串联式和并联式 输液系统 输液泵应具备的性能： 流量精度高且稳定 流量范围宽 能在高压下连续工作 液缸容积小 密封性能好，耐腐蚀 输液系统 输液泵操作注意事项： 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 （二）梯度洗脱装置 等度洗脱 梯度洗脱 二、分离和进样系统 进样器 进样阀（六通阀）、自动进样装置 色谱柱（column） 由柱管和固定相组成 分析柱、制备柱 性能评价 H、n、fs、k和α的重复性，或R。 三、检测系统 （一）检测器(detector)的主要性能 要求： 灵敏度（sensitivity）高（检测限低）噪音（noise）低 线性范围（linear range）宽 重复性（repeatability）好 适用范围广（通用型、专属型） （二）紫外检测器(ultraviolet detector) 检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl 特点： 灵敏度较高（10-6～10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。 局限： 只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 专属型、浓度型检测器 紫外检测器 固定波长检测器 ：254nm 可变波长检测器： 光源：氘灯（和钨灯）， 200～400（800）nm， 单色器，流通池（试样），光电管 光路系统和紫外分光光度计相似 光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector； PDAD)： 一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光 （三）荧光检测器(fluorescence detector；FD) 检测原理： 化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光； 特点： 选择性好，专属型检测器 灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml） 荧光检测器(fluorescence detector；FD) 特点： 选择性好，专属型检测器 灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10