人tnfrsf11b9n 端多肽的原核表达、纯化及其初步分析.pdf

中国骨质疏松杂志 年 月第 卷第 期 ， ， ， !@A ?# $ !A $ FR(5 ^ ]8S2OIO7O8 T’74R ?# _O) !A :O N$ ·论著· 人65/78/ !!-9: 端多肽的原核表达、纯化 及其初步分析 季韶洋 张祥雪 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） ;# = !9!# ?# $9!@A9@ 摘要：目的 对原核表达和可溶性纯化后的65/78/!!- 蛋白氨基端的?A B ! 位肽段进行二级结构分 析。方法 根据已经发表的人65/78/!!- 氨基酸序列，利用=CDE6 程序进行同源性分析，确定所要构建 的65/78/!!- : 端FGH 功能结构域；将目的基因片段克隆入表达载体IJ%K9L9! 并转化大肠杆菌=C?! （ ），于 、 诱导 可获得可溶性融合蛋白，经过 6T H%$ !M N ! O)P C QL6J ?@ B $ R J)0S’SR(O52 E2IR’7O82 A = 亲和层析纯化和 L72E4(88(O5 L7OS2’82 酶切，洗脱的蛋白样品经过E0I2732+@ 凝胶预装柱进一步纯化，最 终获得可溶性、高纯度的蛋白；对目标蛋白进行圆二色谱分析。结果 获得重组质粒 IJ%K9L9!9 S5/78/!!- 并在大肠杆菌中可溶性表达，经亲和层析、酶切、分子筛层析后获得了可溶的、高纯度的 65/78/!!-: 端功能结构域蛋白并对其进行了圆二色谱分析，发现目标蛋白富含 98R22S 。结论 高含量 ! 的 98R22S 更有利于蛋白质参与与相互作用，这对其功能的发挥有着重要意义；对此进行研究可以更 ! 好的理解这种相互作用，并为进一步研究65/78/!!-: 端的结构和功能奠定了基础。 关键词：6:UGEU!!=；骨保护素；原核表达；蛋白质纯化；圆二色谱 !#$%#’() *+,*--(#.，,/(0()%’(#. %.1 ,(2% 3(#4)5*2()%6 ,#,*’(*- *-*%)5 0# 7.0-0883 94 ’*2(.%6 ,#’*(. #0 5#2# -%,(*.- ! #$%’%() ，*+,-. /0%()123 1 4553)3 6 #703(73 ，8309 0() :;3=;’ ， ， (0?3;0=’ 8309 0() !#$ FR(5’ :3-’%)’：;3*)’(=* 6R(8 8S03V ’(8 SO ’5’)V8(*2 SR2 824O53 8S704S072 O/ SR2 : S27(5’) ?A9! I2IS(32 O/ 65-/78/!!- （ ）， 60O7 :247O8(8 U’4SO7 G242ISO7 E0I27/’()(2 2-278 !!- ’/S27 (S (8 8044288/0))V I7OW’7VOS(4 2+I728823 ’53 I07(/(23 1 *’5#1- D5’)V8(*2 SR2 72)’S(X2 82Y02542 -’823 O5 SR2 I0-)(8R23 82Y025428 O/ ZOO E’I(258 65/78/!!- -V =CDE6 -(O98O/S[’72 1 6R25 4O58S704S23 \2528 -V LFG ’53 4)O