海刺猬体腔液凝集素的纯化、 性质及其色氨酸的化学 - 中国水产期刊网.pdf

第27卷第4期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.27 No.4 20 12 年 8 月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Aug. 2012 文章编号:2095-1388(2012)04-0338-06 海海刺猬体腔液凝集素的纯化、 性质 及其色氨酸的化学修饰 李丹彤, 吴振海,李悦,王树敏, 朱莹 摇 摇 (1. 大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室, 辽宁 大连 116023;2. 大连海洋大学 辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复 重点实验室, 辽宁 大连 116023) 摘要:通过DEAE-纤维素52离子交换层析、 Sephadex G-200凝胶层析, 从海刺猬体腔液中分离纯化海刺 猬Glyptocidaris crenularis凝集素 (简称为GCL), 并对其部分性质和色氨酸的化学修饰进行了研究。 结果表 明: 在还原与非还原SDS上, GCL都显示单一蛋白质条带, 其相对分子量为94 462; GCL对人 O 型、 兔、 鸡、 狗红细胞均具有血凝活性, 对兔和狗红细胞的血凝活性最强, 但对人A、 B、 AB型及鲫红细 胞无血凝活性; GCL血凝活性在温度为4 ~33 益时最高, 经36 益热处理10 min后, GCL对兔红细胞的血 凝活性保留25%, 经48 益加热10 min后, 其血凝活性完全丧失; GCL血凝活性在pH为7郾5~8郾5 时最高; 2+ 2+ Ca 对GCL血凝活性无抑制作用, EDTA和Mg 对其血凝活性有抑制作用; GCL血凝活性不被所测试的琢- 乳糖、 D-果糖、 D-半乳糖、 D-甘露糖、 D-葡萄糖和酌-球蛋白所抑制, 但被蔗糖和麦芽糖所抑制, 最小抑 制浓度分别为40 mmol/ L和20 mmol/ L; 用N-溴代丁二酰亚胺 (NBS) 对GCL分子中的色氨酸 (Trp) 残 基进行化学修饰, 有5郾1个Trp残基被修饰, 修饰后其血凝活性丧失75%, 表明Trp残基是GCL血凝活性 的重要组成部分。 关键词:海刺猬; 凝集素; 纯化; 化学修饰 中图分类号: S917摇 摇 摇 摇 文献标志码: A [9] 摇 摇 凝集素是一类具有糖专一性、 可促使细胞凝集 素; Takei等 从 Toxopneustidpileolus 球形叉棘中, 的蛋白质或糖蛋白。 凝集素具有凝集细胞, 抑制肿 分离得到一种海胆凝集素 (sea urchin lectin-1, 瘤细胞增殖, 激活淋巴细胞, 抑制血小板凝集, 抗 SUL-1), 发现 SUL-1 可以诱导 DC 分化成熟和 菌、 抗病毒等多种生物活性。 化学修饰是研究凝集 Th1细胞极化, 并可应用于癌症免疫治疗的DC疫 [1] 素结构与功能关系的基础, 目前已有对川木通 、 苗中。 目前, 关于海刺猬凝集素的研究国内外尚未 [2] [3] 大黑花芸豆 、 黄精 等凝集素分子进行化学修 见报道。 本研究中, 作者从海刺猬体腔液中分离纯 [1-3] 饰的研究 , 以探讨凝集素的作用机理。 化海刺猬凝集素 (简称为GCL), 并对其部分性质