实验九校园环境空气微生物的调查.doc

微生物学实验指导 微生物学课程组 编 龙岩学院 二00六年十月 编写说明 微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，就其学科性质而言它又是一门实践性很强的学科。 实验课的教学目的是训练学生掌握微生物学最基本的实验操作技能，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的微生物学理论知识，同时，通过实验培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是，严肃认真的科学态度；为以后课程的学习和将来的工作以及科学研究打下坚实的基础。 本实验指定是在参考有关院校的微生物学实验教材的基础上，结合我们的实验室条件以及仪器设备状况，经过多方取舍编写而成，可供生物技术及畜牧兽医等专业师生参考。 由于编者水平有限，加上时间仓促、经验不足，在许多方面肯定有不少缺点与错误，希望各位读者批评指正。 在编写过程中，龙岩学院生物系全体师生给予大力支持，在此表示感谢。 编者 2006.10  目 录 实验一 显微镜的使用 1 实验二 微生物染色法 4 实验三 培养基的配制和灭菌 9 实验四 霉菌和放线菌的形态观察 11 实验五 微生物细胞数量的测定 14 实验六 药物敏感试验 18 实验七 糖发酵试验 21 实验八 牛乳中细菌的检查 23 实验九 校园环境空气微生物的调查 26 实验十 病毒的鸡胚培养 28 实验十一 病毒的血凝及血凝抑制试验 30 实验十二 菌种保藏 31 附录 40 实验一 显微镜的使用 一、目的要求 1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。 2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。 3、学习悬滴法观察细菌的运动性。 二、实验原理 （一）、普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜包括机械部分和光学部分两部分。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等（图1-1）。 （二）、油浸系的原理 浸系是在油浸镜与标本之间加1滴香柏油，调整光源检查细菌标本的方法。油浸镜是一种高倍放大的物镜，一般都刻有放大倍数，如95x、100x等。其镜头标记国产镜多用“油”字表示，国外产品则用“Oil”（Oil Immersion）或HI（homogeneous Immersion）表示。而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长，镜片最小，这也是识别的另一种标志。其使用原理是：由于香柏油与玻璃的折光率相似（香柏油为1.515，玻璃为1.52）。镜检时，滴加香柏油的作用是使光源尽可能多的进入物镜中，避免光线通过折光率低的空气（折光率为1.0）而散失，因而能提高物镜的分辨率，使物像明亮清晰（见图1-2）。 三、实验器材 1、菌种 金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌染色玻片标本。链霉菌及青霉的水封片。 2、香柏油、二甲苯、擦镜纸、凹玻片、滴管、纱布。 四、方法步骤 （一）显微镜油镜的使用 1、用低倍镜对光。 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后----上升镜微--油镜转至正下方在载玻片上加一小滴香柏油--小心地下降镜微使镜头浸在油里----用粗螺旋将镜微缓慢上升，寻找目标（物象）----用螺旋调节，使物象清晰----观察记录。 5、观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，最后再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。 （二）细菌三态和荚膜标本的观察 按照上述步骤用油镜观察标本后绘图。 （三）用悬滴法观察细菌的运动 1、取一块凹玻片放在实验桌上，使凹面朝上。 2、取盖玻片一块，滴1%盐酸液，用纱布擦洗。 3、在盖玻片的中央滴一小滴稻草汁培养体（水滴要小而圆）。 4、然后翻转盖玻片，并放于凹玻片上使水滴悬于凹窝中央。 5、悬滴片置于载物台上，缩小光圈，同时下降聚光器，用低倍镜寻找水滴边缘。 6、将水滴中心部分移至视野中央，再高倍镜观察。 五、结果与思考 1、绘图记录观察 结果（细菌的运动性：用虚线表示运动路线末端用箭头表示运动方向） 2、油镜完毕后，镜头应如何处理? 3、观察细菌运动性有何意义?  实验二 微生物染色法 一、目的要求 1、学习掌握单染色的操作技术和无菌操作技术。 2、了解革兰氏染色机理，并掌握其操作技术。 3、学习掌握细菌芽孢染色方法。 二、实验原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体