干细胞的保存与复苏cryopreservation and re-cultivation of stem cells.pdf

幹細胞的保存與復甦 Cryopreservation and Re-cultivation of Stem Cells 演講者 ：施昀豆 日期：2014/11/01 一、前言 • 幹細胞 （stem cells ）之冷凍保存 幹細胞(具有 利用科學方法 添加冷凍保護劑 分裂能力的) 一定的冷凍條件 仍能恢復原 有冷凍保存 置於低溫環 前之生長特 當需要時 境中 ，長期 性和生理功 加以解凍 保存下來 能 細胞冷凍保存之優點 要長期 細胞的生長 一.不需 維持 二.節省人力 、時間、培養基和試劑之消耗 細胞持續生長所造成的 、 三.防止 細胞變異 老 、、 等的等的機會機會 化化 微微生生物物污污染染 四.方便細胞寄送和運輸 五.在不同時間和地點 ，提供相同生理年齡和 品質的細胞 六.長期以後之使用 細胞冷凍保存之缺點 • 冷凍後之細胞存活率 • 冷凍過程對細胞之可回復與不可回復之傷害 • 冷凍保護劑對細胞之選擇性傷害 冷凍保存技術已經發展數十年 • 對於細胞本身之長期保存 ，已頗為成熟 • 尤其是成體幹細胞 （adult stem cells ） • 細胞均呈單一小球 •• 對於 和 之浸潤作用均極 熱傳導 冷凍保護劑 為有效 • 冷凍後細胞之傷害較低 • 存活率極高 二、冷凍保存學 1. 基本觀念 2. 冷凍保護劑 3. 人類胚胎幹細胞製備 4.4. 冷凍保存容器和降溫程序 5. 冷凍細胞的復甦 1.基本觀念 • 冷凍保存最基本的關鍵 如何降低冷凍過程時對細 胞所產生的直接和間接胞所產生的直接和間接傷傷 害 ，讓細胞解凍後，仍保 該有的 和 有 活性 特徵 實際操作上 • 在冷凍操作前或冷凍過程中 將保存之細胞適度脫水 以減少細胞內大的冰晶之形成 因為水形成冰 體積會膨大 造成細胞物理性的損傷 若細胞脫水太嚴重 ，將形成所謂溶質 效應(solute effect) ，細胞內滲透壓太高， 細胞皺縮太嚴重 ，解凍後無法恢復 使細胞在 之 降至 冷凍時 傷害 最小 細胞 之 就會 解凍後 存活率 提高 • 添加適當濃度的冷凍保護劑 • 適當的降溫