食品微生物之检验方法－仙人掌杆菌之检验 101年11月19日署授食字 .doc

食品微生物之檢驗方法－仙人掌桿菌之檢驗 101年11月19日署授食字第1011902826號公告 1. 適用範圍：本方法適用於食品中仙人掌桿菌之檢驗。 2. 檢驗方法：檢體經系列稀釋後，以選擇性培養基培養及計數之方法或以三階三支進行培養，配合MPN計數之方法。 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不超過 15 C FU／培養皿。 2.2. 器具及材料 2.2.1. 乾熱滅菌器。 2.2.2. 高壓滅菌釜。 2.2.3. 冰箱：能保持5 ± 3℃ 。 2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差在 ± 1℃ 以內者。 2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差在 ± 1℃ 以內者。 2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。 2.2.7. 天平：可稱量到 2 000 g 者，靈敏度為 0.1 g ；可稱量到 120 g 者，靈敏度為1 mg。 2.2.8. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.2.9. 加熱器。 2.2.10.顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。 2.2.11. 光源：日光燈。 2.2.12. 吸管：已滅菌。 1 m L吸管應有 0.01 m L之刻度； 5 m L及 10 m L吸管應有 0.1 m L之刻度。 2.2.13. 培養皿：已滅菌，內徑約 90 mm ，深度約 15 mm ，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.14. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、 99 m L或 90 m L標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。 2.2.15. 試管：20 × 150 mm ，13 × 100 m m 試管或其它適用者。 2.2.16. 無菌濾膜：孔徑0.45 μm或以下之親水性醋酸纖維濾膜。 2.2.17. 無菌棉花棒或塗抹棒。 2.2.18. pH測定儀。 2.2.19. 載玻片及蓋玻片：適用於染色及鏡檢者。 2.2.20. 接種針及接種環（直徑約3 mm）：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。 2.2.21. 針筒、藥勺、剪刀、小刀及鑷子：可滅菌或可拋棄式者。 2.2.22. 吸管輔助器（Pipette aid）。 2.2.23. 塗抹曲棒：可滅菌或拋棄式者，直徑3～ 4 mm ，塗抹端長45～ 55 mm 。 2.2.24. 濾紙、研缽、杵。 2.2.25. 褐色試藥瓶：可盛裝 300 m L以上者。 2.2.26. 試藥：氯化鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鉀（K2HPO4）、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、硝酸鉀（KNO3，無亞硝酸鹽者）、結晶紫（crystal violet）、草酸銨（ammonium oxalate）、多粘桿菌素B硫酸鹽（polymyxin B sulfate）、碘化鉀、碘、沙黃O（safranin O）、30%過氧化氫溶液、冰醋酸（glacial acetic acid, 1.049 g /mL）、α-萘酚（α-naphthol）、氫氧化鉀、肌酸（creatine）、酪胺酸（tyrosine）、無水乙醇、95%乙醇、甲醇、鹽酸、液態石蠟油、礦物油、磺胺酸（sulfanilic acid）、鋅粉、孔雀綠（malachite green）、鹼性復紅（basic fuchsin）、TB石炭酸復紅ZN（TB carbolfuchsin ZN）、異丙醇（isopropanol）、石炭酸（phenol）、酚紅（phenol red）、葡萄糖（dextrose）及D-甘露糖醇（D-mannitol）均採用化學試藥級；溶菌酶（lysozyme）、 蛋白腖（proteose peptone）、胰化酪蛋白（trypticase）、蛋白腖（peptone）、去血纖維蛋白綿羊血（defibrinated sheep blood）、酵母抽出物（yeast extract）、牛肉抽出物（beef extract）、洋菜（agar）、胰化酪蛋白腖（trypticase peptone）、植物蛋白腖（phytone peptone）及 蛋白腖3號（proteose peptone No.3）均採用微生物級。 2.2.27. 試劑 2.2.27.1. 革蘭氏染色液（Gram stain solution） 2.2.27.1.1. 哈克氏（Huckers）結晶紫液（初染劑）： 　　溶液A：取結晶紫 2 g 溶於95%乙醇20 mL。 　　溶液B：取草酸銨 0.8 g 溶於蒸餾水80 mL。 　　將溶液A與溶液B混合，靜置24小時後以