浅谈晚期癌症疼痛的处理医学伦理学 - 湘雅麻醉与重症医学网.doc

第二部分 大会交流论文 羟基磷灰石纳米颗粒介导的NR2B-siRNA 对小鼠炎性痛的影响 中南大学湘雅三医院麻醉科 杨 慧 黄 东 欧阳文 廖 琴 目的 观察羟基磷灰石纳米颗粒（HA）介导的N--D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基（NR2B）小干扰RNA（siRNA）鞘内转染后对小鼠福尔马林所致炎性痛的影响以及脊髓背角NR2B蛋白表达的变化，初步探讨羟基磷灰石纳米颗粒作为NR2B-siRNA体内转染载体的可行性。方法 采用化学共沉淀-水热合成法制备HA，用琼脂糖凝胶电泳法及紫外分光光度计检测HA对NR2B-siRNA的结合能力和该复合物在生理盐水中的稳定性。选用体重约18-20g的成年雄性昆明种小鼠48只，随机分为六组。第一组（HN组，8只）：以HA为载体，将NR2B-siRNA鞘内转染小鼠；第二组（PN组，8只）：以聚乙烯亚胺(PEI)为载体，同样的方法将NR2B-siRNA鞘内转染小鼠；第三组（HG组，8只）：用HA作载体，将非特异性的鞘内转染小鼠，NR2B-siRNA的；第四组（HA组，8只）：鞘内给予小鼠同等容积的灭菌HA混悬液；第五组(NS组，8只）：鞘内给予小鼠同等容积的无菌生理盐水；第六组（BC组，8只）：只行鞘内穿刺术，不注射任何溶液。术后第7天，各组均经右足底皮下注入1%立即取腰段脊髓NR2B免疫组化检测结果 对羟基磷灰石纳米颗粒进行透射电镜分析发现颗粒呈细条状或短棒状，分散较均匀, 一维尺寸约40-50nm。在酸性和中性条件下，HA能与NR2B-siRNA以35：1及以上的质量比完全结合，但在碱性条件下与NR2B-siRNA结合能力弱；且HA/NR2B-siRNA复合物在生理盐水重悬液中不会发生解离。对于Ⅰ相急性痛，(P＞0.05)HG组、HA组、NS组和BC组相比，HN组和PN组对于Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著＜0.05HN组和PN组组间差异无统计学意义(P＞0.05)(P＞0.05)HN组、PN组、HG组、HA组、NS组和BC组各组背角NR2B阳性细胞数分别为53.79±11.38，60.63±9.9，99.04±16.39，91.42±14.39，101.21±16.82，96.38±10.27。HG组、HA组、NS组、BC组相比，HN组和PN组背角NR2B阳性细胞数明显＜0.05HN组和PN组组间差异无统计学意义(P＞0.05)(P＞0.05)结论 1. 作为一种新的siRNA载体，羟基磷灰石纳米颗粒（HA）鞘内注射能有效转染NR2B-siRNA，减少福尔马林致痛小鼠Ⅱ相痛行为；2. HA/NR2B-siRNA复合物鞘内注射后能有效抑制小鼠脊髓背角NR2B的表达。1.湖南省肿瘤医院麻醉科 410013；2. 湘雅三医院麻醉科 410013）目的 通过比较NR2B在癌性痛、慢性炎性痛及神经病理痛三种动物模型中脊髓背角的表达，探讨脊髓NR2B在不同性质慢性疼痛中发生以及维持中的作用。方法 选用体重约18-20g的成年雄性C57BL/6小鼠35只，随机分为七组，正常对照组（C组，5只）：不予任何处理；慢性炎性痛组（F1组，5只）：左脚掌皮下注射弗氏佐剂20μl；炎性痛对照组（F2组，5只）：左脚掌皮下注射生理盐水20μl；神经病理痛组（N1组，5只）：暴露出坐骨神经干,用5 - 0 铬制肠线环绕神经干分别做4个轻度结扎环；神经病理痛对照组（N2组，5只）：暴露出坐骨神经干，然后直接缝合肌肉皮肤；骨癌痛组（T1组，5只）：接种Lewis肺癌细胞2×106个；骨癌痛对照组（T2组，5只）：接种等容积的PBS液。术后第七日开始，隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。建立小鼠疼痛模型后第15天，取癌痛组小鼠左股骨分别作苏木素-伊红（HE）染色观察骨质破坏情况，并取各组小鼠腰段脊髓行NR2B免疫组化检测。结果 1 慢性炎性痛、神经病理痛、骨癌痛模型建立后第七天，都出现明显自发痛行为，且持续整个观察期内；骨癌痛组于建模后的第11天起出现明显触诱发痛，表现为术侧50%缩足阈值明显下降，神经病理痛和慢性炎性痛组于建模后7天(即观察的第一天)就测到有明显触诱发痛，表现为术侧50%缩足阈值明显下降，持续整个观察期；骨癌痛组股骨HE染色示骨髓腔内大量肿瘤细胞侵润。 2 脊髓背角NR2B免疫组化检查结果：慢性炎性痛组灰度值为有58.92±4.61，与炎性对照组和正常组相比均有显著差异(P0.05)；神经病理痛灰度值为75.44±5.32，与神经病理痛对照组和正常组比较有显著差异(P0.05)；骨癌痛组73.00± 6.07，与癌痛对照组和正常组比较也有显著差异(P0.05)；三个疼痛模型相互比较，骨癌痛组和神经病理痛组与慢性炎性组有显著差异（P0.05），但骨癌痛组与神经病理痛组比较无