乙酰谷酰胺注射液含量测定系统适用性的修订建议 - 中国药品标准.docVIP

《中国药典》2015年版乙酰谷酰胺注射液含量测定系统适用性的修订建议 徐桂连，邵纯君，贺建华，鹿麟 （大连市药品检验所，大连116021） Revision Suggestion of System Suitability for the Assay of Acetylglutamide Injection in ChP 2015 Xu Guilian, Shao Chunjun, He Jianhua, Lu lin （Dalian Institute for Drug Control, Dalian 116021） 乙酰谷酰胺用于治疗脑外伤昏迷，神经外科手术引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛[1]。乙酰谷酰胺注射液现收载于《中国药典》2015年版二部，其标准〔含量测定〕系统适用性要求乙酰谷酰胺峰与谷氨酰胺峰分离度应大于7.0[2]，但在实际检验中发现，使用多品牌的常规十八烷基键合硅胶柱，且调整流动相比例及其pH，分离度均不能满足要求。为此，经过试验研究，我们对该标准提出了修订建议，以供今后完善该标准作参考，使标准更加严谨及符合实际检验情况。 1仪器与试药 Waters e2695高效液相色谱仪，Sartorius PP-50-P11 pH计 均购于中国食品药品检定研究院，磷酸二氢钾（上海国药，分析纯），甲醇（MREDA，色谱纯） 2方法与结果 2.1存在问题 乙酰谷酰胺注射液〔含量测定〕色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用10%磷酸调节pH值至3.0）-甲醇（95:5）为流动相，检测波长为210nm。取乙酰谷酰胺对照品和谷氨酰胺对照品适量，置同一量瓶中，加流动相溶解并制成每1ml中各约含0.1mg的溶液，混匀，取20μL注入液相色谱仪。乙酰谷酰胺峰与谷氨酰胺峰分离度应大于7.0[2]。然而在实际的检验过程中，按上述色谱条件试验，乙酰谷酰胺与谷氨酰胺峰的分离度达不到7.0。 2.2影响分离度因素的试验考察 2.2.1改变流动相比例 为了达到药典标准要求，本试验以Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250mm， 5μm）色谱柱为例，首先调整流动相比例，其分离度结果见表1。 表1 流动相比例对于分离度的影响 0.05mol·L-1磷酸二氢钾 （10%磷酸调节pH至3.0）/% 甲醇/% 乙酰谷酰胺保留时间 谷氨酰胺保留时间 分离度 90 10 2.174 2.554 3.8 92 8 2.181 2.620 4.1 94 6 2.186 2.720 4.5 95 5 2.185 2.827 5.0 96 4 2.194 2.881 5.2 98 2 2.205 3.137 5.8 表1显示：调整流动相比例，对乙酰谷酰胺峰保留时间影响不明显，而对谷氨酰胺峰保留时间影响较明显，甲醇比例越低，谷氨酰胺峰保留时间越长，分离度也越大。当甲醇比例减少至2%时，分离度增加至5.8，但此时甲醇的比例已经低于普通十八烷基键合硅胶柱所推荐的有机相最低比例5%[3]。因此，通过调节流动相比例，乙酰谷酰胺与谷氨酰胺的分离度不能达到药典标准要求，且流动相比例调整的幅度已经超过药典规定的流动相比例的调整范围。 2.2.2改变流动相pH 流动相比例不变，考察流动相pH变化对分离度的影响，其结果见表2。 表2 流动相pH对于分离度的影响 流动相pH值 乙酰谷酰胺保留时间 谷氨酰胺保留时间 分离度 2.0 2.158 2.869 5.5 2.5 2.176 2.868 5.3 3.0 2.185 2.827 5.0 3.5 2.190 2.825 4.9 4.0 2.196 2.904 5.5 5.0 2.172 2.556 3.6 6.0 2.157 2.399 3.1 表2显示：通过调节磷酸二氢钾缓冲液的pH值可以改变乙酰谷酰胺与谷氨酰胺的分离度。当pH值从3.0调节至2.0时，随pH降低，分离度增加。然而受常规十八烷基键合硅胶柱耐受pH值范围2~8的限制，流动相pH值不能低于2.0。而pH值从3.0调节至4.0时，随pH增加，分离度先减小后变大，当pH值为4.0时，此时分离度最佳。pH值从4.0调节至6.0，随pH增加，分离度反而减小。但流动相pH从2.0调节至6.0，乙酰谷酰胺与谷氨酰胺峰的分离度均达不到7.0。 2.2.3改变色谱柱 试验更换不同品牌色谱柱，考察其对分离度的影响，其结果见表3。表3显示：采用药典标准色谱条件，使用不同厂家的常规十八烷基键合硅胶柱，乙酰胺酰胺与谷氨酰胺峰的分离度并无明显差异，且均达不到7.0。最后，参考肌氨肽苷注射液次黄嘌呤含量测定的检验经验[4]，采用高耐水