诺西肽产生菌的菌种选育.pdfVIP

2012年4月第 10卷 第 10期 · 实验研究 · 87 诺西肽产生菌的菌种选育 刘 平 (丹东市食品药品检验所 ，辽宁丹东 118002) 【摘要】 目的 对诺西肽产生茵进行菌种选育。方法 自然分离、物理和化学诱变育种 (其 中包括紫外线诱变和NTG诱变)的方法。 结果 选定了出发菌株；考察得到紫外线和NTG对出发茵株进行诱变的最佳剂量；出发菌株经几次诱变得到诱变菌株。结论 最终得到的 诱变菌株其诺西肽 的产量是出发菌株的3倍 。 【关键词】诺西肽 ；菌种选育；高产菌株 中图分类号：R37 文献标识码：B 文章编号：1671—8194(2Ol2)10—0087—02 诺西肽 (NOSihePide)是由活跃链霉菌 (Streptomyces 1．4试剂 actuosu)产 生 的一 种含 硫 多 肽 类抗 生 素 ，分 子 式 为 1．4．1亚硝基胍溶液 (NTG) C15H43Nl3Ol2S6，属硫链丝菌素 (thiostrepton)类…。它在体 内能 电子天平精确称取NTG于无菌试管中，加入微量N，N一二甲基 有效抑制革兰氏阳性细菌的活性 。诺西肽 目前主要作为饲料添加 甲酰胺 (DMF)溶解，用适量磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度 (现用 剂，优点是不被畜禽吸收、在体内无残留，微量加入饲料中就可以 现配)。 提高禽畜的出肉率 ，并可加入鱼饵中以防止鱼类的坏死性肠炎及 1．4．2展开剂 加快其生长。国外于20世纪80年代末批准上市，目前 日本和法国已 氯仿：甲醇：醋酸=86：12：2(体积比) 将其列为法定饲料添加剂。 2实验方法 1实验材料 2．1紫外线诱变 1．1菌种 取2ml单孢子悬液于培养皿中，置于紫外灯箱中，在轻微震荡下 出发菌：诺西肽产生菌S．actuosus(由沈阳药大实验室提供)；鉴 照射不同时间，立即避光培养1h，经稀释后涂布培养。 定菌：枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis) 2．2NTG诱变 1．2药品 取单孢子悬液于无菌试管中，加入NTG溶液28℃或40~C水浴，经 亚硝基胍；95％乙醇；糊精 ；酵母粉；NaCI；CaCO，等 稀释后涂布培养。 1-3仪器 2．3效价测定 摇床 (250rm／in)；高压灭菌锅；超净工作台；电子天平；恒温 取发酵液以1：1(VV／)比例加入95％乙醇，37~C浸泡半小时， 水浴 ；紫外灯箱 (紫外灯15W，照射距离40cm)；离心机。 离心取上清液用生物效价法测定。 而作为内源性兴奋递质的谷氨酸一旦增加即会打破这种平衡 ，导致 死亡作用 】，本试验从脑出血缺血后7个时点的动态观察后发现依达拉 神经细胞损害。 奉作用在脑出血缺血后24h达高峰，且 1周仍具有脑保护作用。．依达拉 谷氨酸 (G!u)是v氨基丁酸 (GABA)的前体，经谷氨酸脱羧酶 奉作为一种新的自由基清除剂，有 “自由基清道夫”之称，在脑缺血 催化脱羧后生成GABA，GABA是脑内最重要的抑制性氨基酸 (IAA) 方面，其细胞保护作用可能是通过抗脂质过氧化 ，清除自由基及相关 递质，具有突触后抑制作用，可通过突触后膜超极化、减少离子内 神经递质起到细胞保护作用 。本研究还表明，依达拉奉并不影响血 流、降低细胞代谢及氧消耗等