建立高重组蛋白表达之酵母菌Pichiapastoris.PDFVIP

生物學報（2012 ）47 ：43-49 建立高重組蛋白表達之酵母菌Pichia pastoris 系統 1 1 2 1 郭亭君 張瀞文 李振綱 李冠群 * 1 國立臺灣師範大學生命科學系 2 國立臺灣科技大學化學工程系 （收稿日期： ，接受日期： ） 2013.2.1 2013.4.10 摘 要 利用真核表現系統來製造生產重組蛋白質已被廣泛應用於醫藥、食品與化學工業等方面，嗜甲 醇酵母菌 Pichia pastoris是目前最常被用來大量表達重組蛋白質的真核表達系統，但由於不同外源 基因在P. pastoris中經常會有不同的重組蛋白質表達量，為了要建立一個能穩定且大量表達重組蛋 白質的系統，有許多研究報告提出增加外源基因在 P. pastoris 表達量的方法。本研究採用操縱細胞 整體轉錄作用 (global transcription machinery engineering)的技術，以提升 Candida rugosa重組脂肪 酶在 P. pastoris的表達量，藉由隨機突變 P. pastoris的重要轉錄因子 SPT15 (一種TATA-binding protein) ，達到改變P. pastoris的轉錄體 (transcriptome) ，進而影響Candida rugosa重組脂肪酶 (lipase) 的表達量。利用高通量 (high-throughput)脂肪酶活性測定法，挑出具有高脂肪酶表達量的突變株。 目前已從 464個突變株當中，篩選出 16個突變株其脂肪酶表達量高於野生型 1.5倍以上，其中最 高的一株表達量為野生型的 2.3倍。此結果顯示操縱 P. pastoris整體轉錄作用可以提升外源重組蛋 白在 P. pastoris的表達量。 關鍵詞：酵母菌 Pichia pastoris 、重組蛋白質表達系統、細胞整體轉錄操縱 緒 言 重組蛋白 (recombinant protein)的酵母菌品種 (Macauley-Patrick et al., 2005) ，相對於昆蟲細胞 隨著重組 DNA 操作技術的進步，逐漸開發 和哺乳動物細胞而言，其生長速度快，容易做基 出多樣性的宿主細胞來表達多元化的重組蛋白 因操作，是良好的蛋白表達宿主 (Porro et al., (Danilo et al., 2011) ，這種將外來基因轉殖送入活 2005) 。另外，P. pastoris可進行真核細胞的轉譯 細胞內，利用活細胞做為蛋白質的生產工廠稱為 後修飾 (posttranslational modifications) ，包括蛋白 蛋白質表達系統，具有高價值、低成本的特性， 質摺疊 (protein folding) 、形成雙硫鍵(disulfide 所製造出來的蛋白質產物保有活性，能廣泛應用 bond formation) 、糖基化(glycosylation) 等，不像 於醫藥、食品、化工等方面，像是蛋白質藥物就 原核細胞因為無法進行轉譯後修飾而較易產生 可針對疾病的致病機制做調控，對臨床醫學的研 沒有活性、不可溶的包涵體(inclusion body) ，因 究有良多貢獻；利用酵素的分解能力可改善環境 此P. pastoris可作為表達真核細胞蛋白質的選擇 汙染，使用上不會耗費太多社