分子生物学（刘兴汉）常用分子生物学技术.pptVIP

一、分子杂交与印迹技术的原理 DNA变性： 双链DNA在各种理化因素作用下变为单链的过程。 本质是碱基对之间的氢键断裂。 DNA复性： 去除变性条件，变性DNA重新形成双链的过程。 常用变性条件： 加热 分子杂交： 不同来源的单链核苷酸链根据碱基互补原则形成杂种双链的过程。 分子杂交的目的： 检测DNA和RNA 探针： 分子杂交中和待测核苷酸链碱基互补的被标记的核苷酸链。 增色效应： DNA变性伴随260nm吸收值增高 减色效应： DNA复性伴随260nm吸收值降低 原因： 硷基中共轭双键的暴露 Tm值: 分子杂交的方法 : （固—液杂交） 1. 斑点杂交： 提取DNA或RNA，直接点在硝酸纤维素膜上，和探针杂交 检查有没有你所要的DNA或RNA 反向斑点杂交 固相：多种探针序列 液相：一种待测样品(标记） DNA点阵： 将多种探针序列成排的点在硝酸纤维素膜上，检测DNA或RNA和那一个探针杂交。 待检样品进行标记 一种样品多种探针 基因芯片：