小鼠和大鼠的胚胎培养基及若干相关问题.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（７）：８３９３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 综　　述檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪 小鼠和大鼠的胚胎培养基及若干相关问题 １ １ １ １ １ １ １，２ 高　珊 　陈　炜 　于　磊 　李　静 　孙彩显 　高　杰 　刘　牧 （１中国医学科学院中国医学实验动物研究所　北京　１０００２１　２中国疾病预防控制中心　北京　１０００５０） 摘要　哺乳动物早期胚胎体外培养所用各种化学成份明确的培养基是研究生命科学中一项重要 技术。它已被常规用于研究胚胎早期发育，多种动物及人类辅助生殖技术，转基因动物，动物克 隆等领域。介绍了用于移植前胚胎培养基的研究和发展历史，当前所用化学成份明确胚胎培养 基的主要组成，特别是针对小鼠和大鼠移植前胚胎所用各种培养基及其成份，讨论了这类培养基 发展前景和研究方向。 关键词　移植前胚胎　体外成熟　体外受精　体外培养　培养基　化学成份明确的培养基 中图分类号　Ｑ７８ 　　体外培养（ｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅ；ＩＶＣ）哺乳动物胚胎有多 于今后我国开展ＣＤＭ研究。 种方法，主要是用一种化学成份明确的培养基 １　ＰＥ的ＩＶＣ （ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙｄｅｆｉｎｅｄｍｅｄｉｕｍ；ＣＤＭ）。ＣＤＭ经人工合成、 成分简单，由多种已知盐类和其他成分明确的化合物 １．１　胚胎及其体外存活 及纯水共同组成。动物早期胚胎也称移植前胚胎 　　卵母细胞和胚胎是哺乳动物体内体积最大的细 （ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｅｍｂｒｙｏ；ＰＥ）。ＰＥ在 ＣＤＭ内培养便于 胞。因动物种类不同，卵母细胞或ＰＥ大小也不同，体 ［１２］ 直观研究，是当前生命科学必不可少、被广泛应用的技 积（直径）７０１４０ ｍ 不等。如：小鼠１细胞期胚胎 μ ［１２］ 术之一。如：研究动物和人类胚胎早期发育，人工辅助 约含２０ｎｇ蛋白质 ；囊胚约有１００多细胞，所含蛋白 生殖技术 （ａｒｔｉｆｉｃｉａｌａｓｓｉｓｔｅｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； 质总量仍约２０ｎｇ。而兔子早期囊胚含８００００个细胞 ［１，３］ ［１，４］ ＡＲＴ），转基因动物、动物克隆等，及人类某些生殖疾病 ，蛋白质增加到２００ ｇ 。 μ 治疗， ＣＤＭ均是不可缺少的基本技术。卵母细胞体外 　　动物ＰＥ的ＩＶＣ条件苛刻，稍有不适即可引起细胞 成熟（ｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎ；ＩＶＭ），体外受精（ｉｎｖｉｔｒｏ 质膜和染色体改变，或导致细胞死亡。胚胎体外培养 ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ＩＶＦ），胚胎ＩＶＣ和发育也少不了ＣＤＭ。本 条件包括：（１）环境和物理因素：温度、光照、ｐＨ值、渗 文系统回顾了ＣＤＭ的研发思路和历史；常用 ＣＤＭ的 透压、离子浓度、周围环境气体成分和比例、培养用器 主要成分，特别是胚胎工程中小鼠和大鼠所用 ＣＤＭ成 皿等 ［１，５６］；（２）ＣＤＭ含胚胎需要、能维持和胚胎生长 份和功效进行了阐述。同时探讨了ＣＤＭ的发展前景 发育