家鸡囊胚细胞嵌合体技术研究及应用.pdfVIP

摘 要 据常规嵌合体模型原理，利用具有“十全”特征的地方黑丝毛乌鸡，提出 多表现型遗传标记嵌台体模型的概念，并应用于嵌合体检测：通过对囊胚的分离 与消化、赤道面开窗、不换壳培养以及供体Bcs的转移等一系列嵌合体制作技术 的研究，建立家鸡Bcs嵌合体批量制作技术；结合新型6FP报告基因，研究以 Bcs嵌合体为手段的家鸡外源基因导入途径。此外，基于Bcs嵌台体种系检测的 困境和同型嵌台体与种系嵌合率的关系，探索家鸡w染色体PCR性别鉴定技术在 此领域的应用。 结果显示：①丝毛可作为家鸡家鸡嵌合体除黑羽以外的又一个表现型遗传标 记，但丝羽发生嵌合的难度更高。②利用受体种蛋赤道面开窗、蛋壳切块复原、 不换壳培养等改进的囊胚细胞嵌台体制作技术，实验组最高出壳率为40％ (29，73)，据表现型判断，出壳的嵌合体率18％(13／73)，嵌合体胚26％(19，73)。 其中黑肤、毛脚、五趾、黑喙等供体特征也不同程度地出现在嵌合体雏鸡中。③ 经嵌台体神系传递检测，嵌合体6×乌骨鸡早的测交组合，7只嵌合体公鸡中有 (15／21)、33．3％(18／54)的黑羽特征(羽色嵌台体模型意义上的种系嵌合体) 的有“十全”特征(羽色和羽形嵌合体模型意义上的种系嵌合体)后代。嵌合体 早×乌骨鸡6的测交组合中，获得黑羽、纯乌骨鸡特征率分别为29．4％(35／119)、 1．7％(2／119)。饲养至720d，有2只嵌合体公鸡和所有3只嵌合体母鸡仍保持 了最初的各种嵌合体特征。④Bcs在体外培养4h后，用DEGFP．C1质粒与脂质 体(1m咖L)进行转染，参数为：脂质体5ILL，质粒DNA1．5№，细胞密度为4个胚， 脂质体与DNA形成复合物时间为30mi n．Bcs与脂质体一DNA复合物共培养6h，加 入血清后继续培养12h。荧光显微镜下观察发绿色荧光的Bcs并计数，转染效率 达30％。但随后利用转染Bcs进行转基因嵌合体研究，在荧光显微镜下未榆测到 发绿色荧光的胚。⑤利用W染色体的PCR体外扩增出的447bp带，能灵敏准确 检测囊胚和雏鸡性别，可望从同型嵌合体角度进行提高BCs种系嵌台率的研究。 关键词：家鸡：嵌合体： 囊胚细胞： 基因转移 Abstract for chicken colormodel thetraditional chimeras，the on Based multi-phenotype 1O was forward theblacksilkieschickenwitll model chimeric brought using to chickenchimerasis asaresultof charactcrs．The improvedgreatly wayproduce onthe and of the on studies blastodernl，windowingegg dissociating separating of host wellas thedonor without