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沉默ZFX 对人骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的影响 中文摘要 I 中文摘要 沉默ZFX 对人骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的影响 II 沉默ZFX 对人骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的影响 中文摘要 中文摘要 目的 明确骨肉瘤细胞及组织中ZFX基因的高表达与肿瘤发生的相关性，构建ZFX基 因siRNA慢病毒载体，并转染骨肉瘤Saos-2 、MG-63细胞，观察转染后骨肉瘤细胞 的ZFX 的表达水平。通过下调ZFX基因在骨肉瘤Saos2、MG-63细胞中的表达，观 察其对骨肉瘤Saos2、MG-63细胞侵袭及迁移能力的影响。阐明其在骨肉瘤中的功 能作用。 方法 选取四种骨肉瘤细胞株U2-OS ，Saos-2 ，MG-63和SW1353，及选取47例手术 时病理检查证实为骨肉瘤的组织标本，人脑胶质瘤U251细胞作为ZFX表达的阳性 对照，通过Western blot检测四种骨肉瘤细胞及47例骨肉瘤组织标本中的ZFX 的表 达水平。并分析ZFX表达与骨肉瘤发生的相关性。 根据文献报道的ZFX基因shRNA序列进行合成，并构建ZFX-siRNA慢病毒载体， 经DNA测序确认构建成功后转染骨肉瘤Saos2 、MG-63细胞。采用Real time-PCR 检测病毒转染后Saos-2及MG-63的ZFX表达水平。 最后采用Transwell实验分别观察转染siRNA-ZFX慢病毒载体的Saos2、MG-63 细胞（Lv-shZFX ）、空白对照(Con) 、转染含无义序列的慢病毒载体 (Lv-shCon) 三组细胞的侵袭及迁移能力变化，其中转染含无义序列的慢病毒载体 (Lv-shCon) 为阴性对照。细胞计数使用25μL流式细胞仪分析。运动实验使用Transwell细胞运 动试剂盒。 结果 ZFX 在四种骨肉瘤细胞系均有表达。与U2OS 细胞株相比，三种细胞系（MG63 ， Saos2 和SW1353 ）表达了高水平的ZFX 。ZFX 在51.1% （24/47 ）的骨肉瘤患者组 织标本中高表达。而且，骨肉瘤组织中ZFX 的高表达与转移显著相关（P0.05 ）。 经DNA 测序鉴定确认慢病毒载体构建成功后，分别转染骨肉瘤细胞株Saos-2 及MG-63，质粒携带有GFP 绿色荧光蛋白基因，荧光显微镜下，转染成功的细胞 可见绿色荧光。镜下观察可见GFP 表达在超过90 ％的细胞中可被观察到，证明细 III 中文摘要 沉默ZFX 对人骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的影响 胞转染成功。 通过Real-time PCR验证ZFX基因沉默效率。结果显示，siRNA-ZFX （Lv-shZFX ） 组细胞中ZFX基因在mRNA水平较CON及Lv-shCon组明显下降(P0.05) 。而CON与 Lv-shCon两组间差异无统计学意义(P0.05) 。证实了shRNA 慢病毒对ZFX 基因具 有显著的沉默效率。 Transwell侵袭试验结果显示siRNA-ZFX (Lv-shZFX)组较CON及Lv-shCon组的 侵袭率显著减低（P0.05) 。而CON与Lv-shCon两组间差异无统计学意义(P0.05) 。 结论 在骨肉瘤中，特异性高表达的 ZFX 可能与骨肉瘤的转移相关。 ZFX 基因的 沉默使骨肉瘤 Saos2、MG-63 细胞的侵袭迁移能力明显下降，ZFX 可能为 RNAi 有效治疗骨肉瘤患者提供一个理想的靶点。 关键词：骨肉瘤，ZFX ，侵袭