第六讲：植物原生质体的分离与培养.pdf

第六讲：植物原生质体的分离与培养 主要内容 原生质体培养的概念、意义及研究进展 植物原生质体的分离 植物原生质体的培养 原生质体培养实例 一：原生质体培养的概念、意义及研究进展 原生质体 原生质体的性质 原生质体培养概念及意义 原生质体培养的研究进展 1 原生质体（Protoplast ） 原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质 膜所包围的裸露细胞 包括细胞膜及膜内细胞质及其它具有生命活性的 细胞器 特点： 无细胞壁，质膜直接与外界接触，利于摄取外来遗 传物质 便于进行细胞融合，形成杂交细胞 仍具有全能性 2 原生质体的性质 物理性质 张力 黏性及弹性 流动性 胶体性质 胶体是物质的一种分散状态，一种或几种物质以1-100 nm大小的颗 粒分散于另一种物质中 带电性与亲水性 扩大界面 凝胶作用 吸胀作用 液晶性质 3 原生质体培养定义及意义 原生质体培养（Protoplast Culture）： 利用去掉细胞壁的原生质体为外植体，离体进行细胞培养，以获得 再生植株及细胞产物的培养方法 包括原生质体的分离、培养及植株再生过程 红豆草原生质体培养 原生质体培养的意义 基础理论研究 体细胞杂交 遗传转化 无性系变异及突变体的筛选 细胞器的分离与导入 种质资源保存 基础理论研究 便于开展因细胞壁存在而难以进行研究的课题 在单个细胞水平研究细胞壁的再生、细胞膜的通 透性及离子转运、细胞分裂及分化等 以原生质体制备膜包小泡，研究物质运输及贮藏 等 生殖细胞原生质体利于研究花粉离体萌发机理、 发育过程、机理及调控，发育过程中的细胞骨架 的变化及花粉壁的形成；精卵体外融合及培养等 作为抗寒、抗热等的材料，为早期筛选抗性植株 提供材料，节省时间，空间及资源 体细胞杂交 是原生质体培养最令人瞩目的应用 克服有性杂交不亲和、雄性不育、多胚性干扰及花期不遇等常规 育种中的问题 实现远缘物种与近缘栽培种之间的遗传物质的转移 实现核基因的重组与细胞质基因组的重组，特别是在转移线粒体 及叶绿体控制的有益性状方面，具有得天独厚的优势 已经获得了具有优良性状的作物品系 遗传转化 排除细胞壁上的核酸酶阻止外源DNA进入细胞的作用 使原生质体利于从外界摄取DNA、染色体、细菌、病毒及细胞 器、蛋白质等 对单个原生质体进行准确操作，避免出现嵌合体 可以获得大量均一的原生质体，利于转化成功及条件筛选 已经成为遗传工程较为适宜的转化体系，特别是在瞬时表达方 面 无性系变异及突变体的筛选 无细胞壁的保护，对外界理化因子的诱变更为敏感，突变频率 高 突变后，可以通过有丝分裂保持下来，并一直维持纯系 细胞器的分离与导入 以原生质体为材料，温和破碎质膜，可以分离到完整的细胞 器，如叶绿体、线粒体、细胞核甚至染色体等，用于细胞器的 结构、生理生化功能研究，以及分子生物学分析提供了便利条 件 种质资源的保存 低温保存，具有细胞低温保存的所有优点 对低温伤害对细胞内部结构伤害的研究提供了便利的材料 4 原生质体培养的研究进展 1880年，Hanstein首次起用原生质体(protoplast)一词 1892年，Clercker首次以机械方法从藻类中分离到原生质体 1960年，Cocking首次应用酶法制备番茄根原生质体获得成功 1971年，Takebe 首次得到烟草叶肉原生质体培养的再生植株 1985年，Fujimura 第一例禾谷类作物－水稻原生质体培养再生植株 1986年，Spangenberg 单个原生质体培养再生植株在甘蓝型油菜上获得 成功 通过原生质体获得再生植株的植物约有300余种，其中有20多种为我国 首先报道 二：原生质体