水稻硅结合蛋白的鉴定及功能研究.pdfVIP

摘要 本论文首次报道了水稻叶片中硅结合蛋白的分离提取方法、分子特征及其功能与分布，从 分子水平上揭示了水稻控制硅沉积的机制，并进一步探讨了硅结合蛋白与硅减轻水稻重金属镉 毒害的笑系。研究的主要结论如下： 通过低温捣碎分级分离法我们成功从水稻叶片中分离到天然硅体，进而分离到一种与硅紧 密结合的分子昔为117 117，SBPIl7)。 kDa的蛋白，称之为硅结合蛋白(Silica-BindingProtein 通过N-末端测序和奄询NCBI数据库，鉴定了SBPll7是一种未知功能的富脯氨酸蛋白家族的 成员，其篮自质序列号为AA072557．1，它的氨基酸组成与硅藻和黄瓜中发现的硅结合蛋白相 似，但排列顺序明显不同，说明其可能是一种禾本科植物所特有的控制硅沉积代谢的蛋白。 体外实验证明SBPI 17具有明显的诱导硅酸沉淀的能力，其沉淀的硅酸量与加入的蛋白量 呈正相_芙，并且与加入的硅酸量也呈正相关．在植物细胞生理DH范围5．0左右蛋白活性最强。 人J：合成SBPI 17 17的两个肽段与匙孔嘁血蓝蛋白载体偶联后免疫兔子，获得了抗SBPI 的专一性抗体。免疫印迹检测表明此抗体还能与其它累积硅的禾本科植物硅体中的蛋白发生交 义反应，但不能与般子叶植物(如番茄叶)蛋白反应，这说明与SBPI17相似的硅结合蛋白广 泛存在于积累碎的乐本科植物之中，硅在高等植物中的积累具有系统发育上的特征。免疫细胞 化学检测SBPll7主要分布在水稻叶片的泡状细胞中；组织印迹法显示SBPll7主要分布在水 稻根茎叶的外表皮中，在根和叶的维管组织中也有分布，这与硅在水稻体内的分布是一致的， 说明此蛋白参与控制硅在水稻体内的沉积。 另外，我们还研究了硅结合蛋白与硅提高水稻抗重金属镉毒害的关系。水培实验发现施硅 能显著减轻水稻镉毒害症状，使镉向地上部的运输显著降低。质外体荧光示踪剂PTS 运输鼍。进一步州x一射线能谱分析和免疫细胞化学定位显示硅结合蛋白、硅和镉三者主要分布 在水稻根系的内皮层和纤维层细胞附近，说明硅结合蛋白可能通过诱导硅在以上两个部位沉积， 影响镉的质外体运输，减轻镉的毒害。 关键词：硅，硅结合蛋白，水稻，镉，免疫细胞化学定位 Abstract was timeto themethodof and the The thefirst report isolatingextractingsilica-binding paper the of molecular functionanditsdistribation．Weelucidatedmechanism protein，its character，the in molecularlevel．In the between silica ricefrom deposition addition，weinvestigated relationship the andthemechanismthatsilicaalleviatedthe ofcadmiuminrice．The silica—bindingprotein toxicity mainresults are“following： Wesucceededin thenativesilicabodiesfromri