谷氨酰胺和色氨酸稳定性测试.pdf

Application 谷氨酰胺和色氨酸稳定性测试 在进行氨基酸分析时，一般使用市场购买的混合标准品，由于谷氨酰胺(GluNH )和色氨酸(Trp)稳定 2 性的问题，在进行这两个氨基酸分析检测时需要自行配制添加到混合标准品中，一般都会推荐现用现配 制，不建议使用长期保存的标准品。 为了解决广大氨基酸分析工作者最为关心的保存时间问题，本文探讨了不同溶剂和保存方法对 GluNH2和Trp的稳定性的影响。 1、稳定性验证方法 （1 ） 样品配制方法： 称量 GluNH2 7.3 mg 和 Trp 10.2 mg ，用不同溶液配成 2.5 μmol/mL 溶液 ，进一步稀释成 0.1 μmol/mL 溶液 （更详细的样品配制、稀释信息、测试方法请咨询天美公司） （2 ） 分析方法： 仪器：L-8900 高速 全自动氨基酸分析仪 分析柱： 60 mm 高理论塔板数分离柱 除氨柱： 40 mm 长寿命除氨柱 衍生单元：40 mm 长寿命高灵敏度反应柱 缓冲液：MCl 缓冲液（可从和光、关东、三菱购买，也可根据说明书组分表自行配制） 衍生试剂：茚三酮（可从和光、关东、三菱购买，也可根据说明书组分表自行配制） 检测波长：440 nm、570 nm ，采用光栅分光 进样量：20μL 2、稳定性验证图谱 图 1 溶剂 A 刚配制的标准品图谱 图 2 溶剂 A 保存 12 周的标准品图 Application 图 3 溶剂 B 刚配制的标准品图谱 图 4 溶剂 B 配制 12 周后的标准品图谱 3、不同溶液不同保存条件下的数据比较： 图 5 谷氨酰胺随时间浓度变化趋势 图 6 色氨酸随时间浓度变化趋势 通过以上图谱可得出如下结论： Application （1 ）以刚用溶剂B溶解之后的峰面积值为基准、计算了面积比 (%)。 （2 ）用溶剂A溶解的谷氨酰胺的浓度慢慢降低、但溶剂B稀释能减缓其降低。 （3 ）色氨酸是与溶解液或保管温度关系相对较小，变化不是很明显。 欲了解更多的测试方法、样品处理、溶剂信息、保存方法请咨询天美公司