商陆皂甙甲抑制大鼠腹腔巨噬细胞释放血小板活化因子 - 药学学报.PDF

药学学撤 ,~ctaPhewmaceuticaSinica199}．26(10)721～724 I } ， 商陆皂甙甲抑制大鼠腹腔巨噬细胞 释放血小板活化因子 方 军 郑钦岳 ● f第t军医大学药学院药学理教研室，上海 200433) 提要 忙西霉素lA玎：s)刺激大鼠腹腔旺嚆细咆释放血小板活化因 f(PAFJ，片{洗涤血小板 聚集的方法测定，证明商陆皂甙 甲在 0l～ 10(’ttmol／1．敞度范围 及所试的时间范围内 呈荆 量及时间依赖性抑制大鼠腹腔巨噬细胞释放PAF：商陆 皂甙 甲可能就是通过抑制体内PAF生成 而起抗炎作用的 关键词 商陆 皂甙 血小板活化因 ；卡西霉素，巨噬细胞 商陆皂甙甲(esculentosideA，EsA)是从 中嗣商陆iP wlaccaescutentaVanHOUttC)的 块根 中提 取 的一种 三萜 皂甙类化 合物．其化学 名为 3一(_(一D一 吡哺 葡萄糖 一 一 D一吡喃木糖)一2一羟商陆酸 一3—0一 甲酯 “。动物实验表明，EsA有显著的抗炎 作用 。血小板活化因子(PAF)是一种重要的炎症介质和细胞介质 ，。巨噬细胞是分泌PAF 的主要细胞之一。为 _『探索 EsA的抗炎作用 与其对PAF的台成分泌和作用有无影响，我们用 大鼠的腹腔巨噬细胞作为研究PAF的分泌细胞，对 EsA的作用进行 了研究，结果发现 EsA 确有抑制大鼠腹腔巨噬细胞分泌 PAF的作 材料和方法 一 ． 动物 Wistar大鼠， ：不拘，体重200～ 300g：新西 兰兔 0不拘，体重 2500～ 3000 两种动物均由第二军医大学动物房提供。 二．药品和试剂 EsA 由第二军医大学药学院植他教研宅易杨华副教授提供：盐酸阿的平 由 海寄生虫病 研究所赠送：PAF标准品由瑞士 P Hoffmann—LaRoche公司的Hadvary博士惠赠：牛 血清 白蛋白(BSA)、磷酸肌酸擞酶(CPK)为 上海生物制 品研究所产 品：磷酸肌酸(CP)为 Merck公司产品；卡西霉素(A^ )．RPMI—l640和消炎痛为Sigma公司产品。 三．方法 (一)大 鼠腹腔巨噬细胞的制备 用颈椎脱臼法处死大鼠，在无菌条件下刚RPM1—1640液灌洗大鼠腹腔，将收集到的 腹腔灌洗液离 b(5oo×g，lOrrJn)，得到细胞沉淀 州 RPMI一1640液将这些细胞洗涤两 次，计数，然后用含 10％ 小牛血清的 RPMI～1640一BSA (BSA 占0．25％，W ／V)制成细 胞悬浓(5×10细胞 ／ml1 本文于1990年 10H 15日收剜 722 药学学报 A：taPhanmoeu出aS 1991i26(10)：721～724 (二)巨噬细胞培养上清液的制备 将上面制备的巨噬细胞，加到小培养皿 内(O．5ml／皿)，置37℃孵育2h，使之贴壁。 然后倾去上清液。用RPMI一1640一BSA洗涤两次，除去非贴壁细胞。每皿加入0．5ml含 A^ (1#gAn1)和所试药物的RPMI一1640一BAS，37℃继续孵育50min，收集上清液， 离~(500×g，10min)，r除去污染细胞，上清液 一2O℃保存，供测定PAF含量用。 ^一 (三)兔洗涤血小板的制备 v『 用硅化过的注射器在兔心取血，用ACD(枸橼酸钠2．5g，枸橼酸 1．36g，葡萄糖 2．21g， 100ml蒸馏水溶解)抗凝(1：6)，离心，分离富含血小板血浆(