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rDNA文库的RFLP分析
硕士论文 红壤地区土壤氨氧化细菌特异性16S
摘 要
氨氧化细菌是一类化能自养细菌，广泛存在于大多数环境中。该类细菌能以氨作
为唯一氮源，将其氧化成亚硝酸盐并从中获得能量，在多数环境中该氧化过程被认为
是影响硝化速率大小的一个决定因素，在全球氮循环中具有重要作用。目前国内针对
氨氧化细菌的研究多集中在活性污泥和污水处理器等方面，鲜少涉及其在土壤特别是
酸性土壤中的群落结构分析。
本文主要对红壤荒草地土样中的氨氧化细菌多样性和群落结构进行分析。采用
MPN法统计土样中的氨氧化细菌数量，并用氨氧化细菌培养基对土样中的氨氧化细
rDNA研究了氨氧化细菌在红
菌进行富集培养。采用不依赖于培养的方法，利用16S
壤荒草地中的群落多样性。比较土样总DNA的提取方法，选用稳定性最高的blending-
间接法提取的总DNA作为模板，应用特异性的16SrDNA引物通过PCR扩增建立了
相应的16SrDNA文库。用RsaI和HhaI两种四碱基限制性核酸内切酶对文库中的
16S
rDNA片段进行了限制性片段长度多态性分析。对酶切类型的系统发育分析表明，
通过间接提取法建立的16SrDNA文庠中存在大量类氨氧化细菌序列。用SDS．直接
法提取的总DNA建立的富集液16SrDNA克隆文库中，氨氧化细菌群落结构较为单
一，以珏硝化单胞菌为主。
关键词：氨氧化细菌：红壤；DNA提取；文库；限制性片段长度多态性
摘 要 硕士论文
ABSTRACT
and existinmost
bacteria widely
Ammonia-oxidizingrAOB)arechemolitho-autotrophs
are intheir tolive thesole
environments．These
unique ability upon energy
organisms
ammoniato arealso forthe
sourcefrom rate—limiting
converting nitrite．Theyresponsible
in
ofnitrificationinawide of them the
step varietyenvironments，makingimportantglobal
of researchesOnAOBare aboutactive
cyclingnitrogen．Hitherto，domesticmainly sludge，
and ofAOB structurein-soils
sewage SOon，whileinvestigationscorarnunity
processor
acidicsoilsseldom
especially a
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