细胞因子、生长激素和培养基对体外培养的兔关节软骨细胞影响的实验研究.pdfVIP

缩略语 聚胺多糖 GAG 转化生长因子01 TGF—B 胰岛素样生长因子1 IGF一1 生长激素 GH 骨形态发生蛋白 BMP 血小板源性生长因子 PDGF 碱性成纤维细胞生长因子 bFGF 表皮生长因子 EGF 软骨生长因子 CDGF 肝细胞生长因子 HGF 甲状旁腺激素相关蛋白 PTHrP 3—2，5．二苯基四氮唑溴盐，商品名噻唑蓝 MTT 中文摘要 细胞因子、生长激素和培养基对体外培养的兔关节软骨细胞影响 的实验研究 南京医科大学第一附属医院 骨科2001级 硕士研究生 胡翰生 导师 范卫民教授 指导老师 刘锋副主任医师 王青副主任医师 目的 探索IGF．1、TGFp1、GH和培养基对体外培养的兔关节软 骨细胞增殖和分化的影响。 方法 实验分两部分进行，第一部分首先将三月龄兔关节软骨细胞 分别接种于含15％小牛血清的1640和F．12培养基中，然后镜下 观察其贴壁时间和第1，2，3，4，5，6，7，14和21天细胞计数，阿新 蓝比色法定量检测两组细胞GAG的分泌，MASSON染色结合图 像分析法半定量检测两组细胞胶原合成。 分别刺激第三代软骨细胞，一周后以MTT法检测各组细胞增殖 率，同前方法检测GAG和胶原分泌量。然后，通过形态学的变 化和组化染色观察软骨细胞在细胞因子作用下是否发生去分化， 已发生去分化的细胞在细胞因子的作用下能否再分化。 最后，以配对f检验比较两种培养基对软骨细胞增殖和基质 合成的影响；以单因素方差分析和x2检验比较IGF．1、TGF—Bl、 GH、IGF．1+GH对软骨细胞增殖和基质合成的影响。 结果 l 原代细胞在1640培养基中贴壁更早、生长较快；传代后 两种培养基中软骨细胞增殖速度无区别，但1640组分泌基质功能 更活跃。 2细胞因子和生长激素刺激兔关节软骨细胞增殖的最佳浓 1 100ng／ml+ 500ng／ml，IGF 度为：TGF 00ng／ml，GH 40ng／ml，IGF GH 500ng／ml。IGF+GH组细胞增殖速度和基质分泌量提高最明 显，其次是IGF一1组，再次是TGF—D1组，GH组影响最小。 3 TGF、IGF一1能维持软骨细胞表型，减缓其去分化，TGF．B1 还有刺激软骨细胞再分化作用。 结论 用1640培养基培养兔关节软骨细胞更合理，它更有利于原 代关节软骨细胞的存活和增殖。而使用适当浓度的细胞因子可明 显提高关节