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第 8 卷第 3 期 过 程 工 程 学 报 Vol.8 No.3 2008 年 6 月 The Chinese Journal of Process Engineering June 2008 磁性 SiO 纳米粒子的制备及其用于漆酶固定化 2 1,3 1 2,3 2 1 刘 宇 ， 郭 晨 ， 王 锋 ， 刘春朝 ， 刘会洲 (1. 中国科学院过程工程研究所绿色过程与工程重点实验室，北京 100190 ； 2. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190 ；3. 中国科学院研究生院，北京 100049) 摘 要：以氨基修饰的磁性 SiO2 纳米粒子为载体，通过交联剂戊二醛固定漆酶，对固定化条件进行了优化，比较了 固定化酶与游离酶的酶学性质. 结果表明，漆酶固定化的最佳条件为戊二醛浓度 8%(ω) ，固定化时间 6 h，缓冲液pH 值 7.0，初始酶液浓度 0.15 g/L. 固定化的漆酶的最适pH 为 4.0 ，最适温度为20 ℃. 在 60 ℃条件下保温4 h ，固定化漆 酶仍能保持酶活力 60.9%，在连续 10 次操作后，酶活力仍能保持 55% 以上，其热稳定性和操作稳定性均比游离酶高. 关键词：磁性 SiO2 ；纳米粒子；漆酶；固定化 中图分类号：Q814.2 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2008)03−0583−06 固定大量的酶，另外在酶促反应中，底物更容易与固定 1 前 言 化酶接触，达到更好的催化效果. 磁性 SiO2 纳米粒子不 漆酶(EC1.10.3.2)是含有 4 个铜离子的多酚氧化酶， 但具备纳米尺度，而且与其他载体相比其制备过程相对 可分为真菌漆酶和漆树漆酶两大类，它主要分布在一些 简便，因此用磁性 SiO2 纳米颗粒作为载体固定化漆酶有 高等植物如漆树及一些真菌如白腐菌中[1]. 漆酶作用的 很好的应用前景. 底物相当广泛，包括许多芳香族化合物，如氯代酚、多 本工作通过在共沉淀过程中加入柠檬酸三钠和十 氯联酚、二氯苯胺、杀虫剂、染料等[2−5]. 由于具有相当 六烷基三甲基溴化铵(CTAB) ，制备出分散性较好的 Fe O 纳米颗粒，以此 Fe O 纳米颗粒为核，用改进的 宽泛的底物专一性和较好的稳定性，漆酶在废水处理、 3 4 3 4 生物漂白、芳香化合物转化、生物传感器构建等方面具 溶胶−凝胶法制备出分散性较好的磁性 SiO2 纳米粒子， 有重要应用价值[6−9]. 但游离漆酶在使用过程中易随环 再通过硅烷偶联剂将其氨基修饰，然后以氨基化的 SiO2 境的变化变性失活，且不易从反应体系中分离重复使 纳米粒子为载体，通过交联剂戊二醛固定化漆酶，研究 用，这在一定程度上限制了漆酶的工业化应用. 酶固定 了交联剂浓度、固定化时间、缓冲液pH 值、初始酶液 化技术是实现酶重复连续使用和改善其稳定性的有效 浓度等因素对固定化漆酶活力的影响，确定了载体固定 手段，因此漆酶的固定化研究引起了人们的广泛关注. 化漆酶的最佳操作条件，同时还比较了固定化酶和游离 漆酶的固定化载体主要有多孔玻璃[1