脐血单个核细胞扩增前后的骨髓基质植入能力及条件研究.pdfVIP

脐血单个核细胞扩增前后的骨髓基质植入能力 及条件研究 硕士研究生：袁华魏 指导教师：宋振岚 教授 专业名称：内科学 摘 要 目的：模拟体内造血微环境，植入体外扩增和未扩增的脐血干／祖 细胞，探讨脐血干／祖细胞和扩增后祖细胞的植入能力，改善植入条件， 提高移植效率，最终达到造血重建和免疫重建，为脐血干细胞移植成 功应用于成年患者提供理论和实验依据。 方法：应用体外细胞液体培养、混合集落培养(CFU．mix)及鉴定、 细胞化学染色、流式细胞仪(FACs Calibur)分析检测等技术进行实验。 cell， ①应用密度梯度离心法获得脐血的单个核细胞(mononuelear MNC)，选用细胞因子组合液体培养体系对其进行体外扩增，预铺设骨 marrow stromal 髓基质细胞滋养层(bone cell，BMSC)，利用铺展贴壁 实验研究其植入能力。 ②扩增前后脐血于／租细胞植入能力研究的实验分组：A组为扩增 后细胞植入组(祖细胞)；B组为未扩增细胞植入组(干／祖细胞)；C 组为混合细胞植入组(1／3A组+2／3B组)。 ③改善植入条件研究的实验分组如下：A组为混合细胞组接种于 脐血基质细胞滋养层；B组为混合细胞组接种于成人正常骨髓基质细 胞滋养层；C组为混合细胞组接种于急性自血病完全缓解骨髓基质细 胞滋养悬D组为混合细胞组接种于经碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth 胞滋养层。 结果： ①1．0649／L 平均含量为2．35±0．39％。 数扩增近28．6倍，扩增后表达CD44的细胞数量超过扩增前水平。 ③未扩增的脐血细胞组有15．1±2．1％的MNC植入成人正常骨髓 混合细胞组有25．2±3．8％植入hBMSC，较前两组有显著性差异 (P0．05)。 ④脐血混合细胞组接种于脐血基质细胞滋养层(A组)、正常成人 骨髓基质层(B组)、急性白血病完全缓解骨髓基质层(C组)、及经 bFGF处理的完全缓解白血病骨髓基质层(D组)，其植入率分别为42．2 集落形成率(51．4-4-6．7／2x 异(P0．05)。 结论： ①不同密度梯度比重的淋巴细胞分离液分离脐血造血干／祖细胞 具有不同效果，1．0649／L Ficoll—hypaque所分离的脐血造血细胞中 CD34+含量高，体外有较强的增殖能力。 ②单份脐血进行部分冻存、部分扩增，进而混合植入，可解决脐 血造血细胞数量不足和扩增后由于细胞分化所致的干细胞缺如问题。 ③经bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)处理的急性白血病完全缓 解的骨髓基质微环境可以提高脐血造血细胞的植入率。 关键词：脐血体外扩增植入率 -2· ofUmbilical Conditions the and The on Ability Study Implant Marrow Bone MononuclearCellinto CordBlood